佐剂作为非特异性免疫增强剂，是灭活疫苗、亚单位疫苗和重组蛋白疫苗等多种疫苗不可或缺的辅助成分。佐剂通过激活和刺激固有免疫细胞，增强机体的适应性免疫应答，从而增强疫苗的免疫原性。佐剂按作用机制主要分为免疫刺激剂和递送系统。此文对目前部分已上市人用疫苗佐剂及新型疫苗佐剂的作用机制及研究进展进行综述，为合理使用现有佐剂及开发新型佐剂提供参考。

基孔肯雅病毒感染可引发基孔肯雅热，该病毒在热带及温带的广泛区域均有流行，已成为全球性公共卫生问题。基孔肯雅热以对症治疗为主，没有特效药物，接种疫苗是预防基孔肯雅病毒感染的经济有效手段。虽然目前已有2款疫苗被批准在局部地区使用，但远不能满足高风险区对疫苗的需求。此文对基孔肯雅病毒疫苗研发现状进行综述，重点对已上市疫苗、进入临床试验阶段的疫苗和有潜力进入临床试验的疫苗进行总结。

国家药品监督管理局于2021年9月启动了国际药品检查合作计划（Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme，PIC/S）的预加入申请工作，并于2023年11月8日成为正式申请者。PIC/S是国际性的GMP标准制定和推广机构，其GMP指南被广泛认为是药品生产质量管理的权威标准。此文对PIC/S与中国GMP的主文件结构与内容、无菌附录、生物制品附录的异同进行对比和研究，旨在查找和发现差距，为我国药品监管机构和药品生产企业提供改进措施，不断提升我国药品的质量和安全性，增强国际竞争力。

目的 探究应用DEAE Sephadex A-50凝胶吸附法从去冷沉淀血浆上清液（cryoprecipitate reduced plasma supernatant, CRPS）分离纯化人凝血酶原复合物（human prothrombin complex concentrate, PCC）的可行性。方法 采用凝胶吸附法从CRPS中连续制备3批次PCC制品，对该工艺中PCC原液、半成品和成品的人凝血因子Ⅸ（human coagulation factor Ⅸ, FⅨ）效价回收率、杂蛋白含量、干热病毒灭活效果进行检测分析；对PCC成品进行检定分析和稳定性试验。结果 以CRPS中FⅨ效价为100%，凝胶吸附工艺中PCC原液、半成品、成品的FⅨ效价回收率分别为（65.0±2.1）%、（56.3±4.2）%、（40.3±1.8）%；原液中杂蛋白含量较低；干热处理前后各项质量指标均合格。PCC成品检定显示，其物理、化学、效价与FⅨ比活性、活化凝血因子活性等质量指标均满足中国药典2020年版三部要求。加速和长期稳定性试验的各项质量指标检测结果与0个月相比虽有所浮动，但均合格。结论 采用DEAE Sephadex A-50凝胶吸附法可成功从CRPS中分离纯化出PCC。

目的 应用微量致细胞病变（micro-cytopathic effect，CPE）法建立抗柯萨奇病毒A组6型（coxsackievirus A6，CV-A6）中和抗体检测方法并进行方法学验证。方法 用人横纹肌瘤细胞和CV-A6检测毒株建立基于CPE的中和抗体检测方法，并对相对准确度、精密度、线性、专属性和耐用性等进行验证。结果 建立了针对CV-A6免疫血清的中和抗体效价测定方法。3份不同稀释度（1×、16×、256×）的血清参考品各测定3次，相对偏倚分别为﹣2%、﹣4%、﹣16%，拟合线性回归斜率为1.065，相对准确度良好；几何变异系数（geometric coefficient of variation, GCV）为19%～50%，重复性良好。取10份小鼠免疫血清于不同天测定3次中和抗体效价，GCV为0%～75%，中间精密度良好。将抗CV-A6中和抗体血清参考品稀释9个稀释度，独立测定3次，拟合直线的回归系数为0.93，直线回归具有统计学意义（F=340.99，P＜0.000 1）。阴性血清中和效价均＜8，表明专属性良好。不同细胞代次、不同细胞密度、不同病毒载量、不同培养时间、待检血清反复冻融不同次数及短暂储存时间范围的GCV为23%～101%，表明该方法耐用性良好。结论 成功建立了抗CV-A6中和抗体检测方法，该方法具有较好的相对准确度、精密度、线性、专属性及耐用性，可用于评价CV-A6免疫血清的中和抗体水平。

基孔肯雅病毒（chikungunya virus, CHIKV）是由伊蚊传播的甲病毒。CHIKV感染可导致基孔肯雅热，近年来在全球范围内多次暴发，引发严重的公共卫生问题，目前尚无特异性抗病毒药物获批上市，临床治疗仍以对症和支持治疗为主。随着CHIKV传播范围的扩大和疾病负担的加重，开发有效的抗病毒药物成为迫切需求。此文综述了CHIKV的流行情况、基因组结构和功能以及近年来抗CHIKV药物，包括直接抗病毒药物、宿主靶向药物等的研究进展。此文还探讨了药物开发过程中面临的挑战，如发生耐药突变、药物安全性及临床转化等问题，并展望了未来研究方向，包括多靶点药物设计、联合用药策略以及计算机辅助药物设计与人工智能等。通过系统梳理现有研究成果，为抗CHIKV药物的进一步研发提供参考和启示。

目的 对柯萨奇病毒B组5型（coxsackievirus B5, CV-B5）的病毒蛋白1（viral protein 1, VP1）进行生物信息学分析，以期为后续免疫监测、表位疫苗设计和疾病研究提供科学依据。方法 应用ProtParam、SignalP-6.0、DeepTMHMM-1.0、NetPhos-3.1、NetNGlyc1.0、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、BCPred和IEDB在线网站预测分析VP1的物理化学性质、结构特征和线性B细胞抗原表位。结果 CV-B5 VP1是不稳定且呈碱性的亲水性蛋白，无信号肽结构，有1个跨膜结构域。预测该蛋白可能存在33个磷酸化位点和15个糖基化位点。VP1二级结构以无规则卷曲为主，存在多个潜在的优势Ｂ细胞抗原表位。结论 利用生物信息学工具对CV-B5 VP1进行预测分析，初步判断了VP1的生物学功能及线性抗原表位。

目的 通过比较13价肺炎球菌多糖结合疫苗在BALB/c、KM、CD1小鼠品系体内的免疫应答，评价该疫苗的最佳小鼠免疫原性模型及此模型的最佳小鼠性别及免疫剂量。方法 将13价肺炎球菌多糖结合疫苗分别以每针次0.05、0.10、0.20、0.40 μg的剂量免疫3个品系小鼠，采用ELISA分析免疫应答差异以评价最佳小鼠模型；比较4个剂量在最佳小鼠模型中的雌雄小鼠应答差异以评价最佳小鼠性别；比较4个剂量免疫最佳性别的最佳小鼠模型以评价最佳免疫剂量。 结果 3个品系中，多数血清型在CD1小鼠中免疫应答值最高，KM小鼠应答最弱。在CD1小鼠品系中剂量与免疫应答之间有明显量效关系。4个剂量免疫CD1雌雄小鼠，0.05 μg剂量时免疫应答值均较低，在0.10、0.20、0.40 μg剂量时，几乎所有血清型在雌性小鼠中产生的免疫应答值均高于雄性小鼠。4个剂量免疫CD1雌性小鼠，除3、9V、19F、23F型外，其余血清型在0.20 μg剂量产生的免疫应答值均明显高于其他3个剂量。结论 评价13价肺炎球菌多糖结合疫苗免疫原性的最佳小鼠模型为雌性CD1小鼠， 最佳免疫剂量为0.20 μg。

目的 通过分析口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）单价病毒原液内猪胰蛋白酶残留量、牛血清白蛋白残留量、Vero细胞DNA残留量及片段大小，为该疫苗的杂质质量控制提供依据。方法 采用ELISA分别检测30批单价病毒原液中猪胰蛋白酶残留量和牛血清白蛋白残留量；用磁珠提取法纯化30批单价病毒原液中残留Vero细胞DNA，分别采用荧光染色法和毛细管凝胶电泳法检测Vero细胞DNA含量、DNA片段大小及分布。结果 在已检测的30批单价病毒原液中，猪胰蛋白酶残留量为3.8～7.2 μg/mL，牛血清白蛋白残留量为85～268 ng/mL，Vero细胞DNA残留量为48～115 μg/mL，Vero细胞DNA片段大小分布在201～2 000 bp的占比为73.4%～91.9%。结论 口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）单价病毒原液的杂质残留可控。

目的 开发抗NF-κB受体激活蛋白配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）单克隆抗体（单抗）的纯化工艺。方法 采用深层过滤澄清上游细胞培养液去除细胞，澄清后的培养液经过亲和层析捕获、低pH病毒灭活、阴离子交换层析、阳离子交换层析、除病毒过滤、超滤浓缩、透析置换、除菌过滤等步骤，获得单抗原液。通过收率和产品相关杂质去除情况评价亲和层析纯化效果，通过监测穿透点计算填料的动态载量（dynamic binding capacity，DBC）；通过考察不同的pH和温度条件对样品的纯度和活性影响，确定低pH病毒灭活条件；通过考察目的蛋白在不同缓冲体系下的稳定性、工艺相关杂质去除情况，确定合适的阴离子交换层析缓冲体系并考察纯化效果和DBC；通过线性洗脱，分段收集考察杂质情况确定阳离子交换层析工艺参数；通过处理量、通量、流量衰减确定病毒滤器的型号；根据浓缩、透析及过滤除菌说明书和平台技术确定滤膜孔径、进液流速和跨膜压力，再根据确定的参数进行浓缩及透析置换；最后经0.2 μm膜除菌过滤获得原液，并检测纯度和杂质。结果 以MabSelect SuRe为亲和层析填料，DBC 45.3 mg/mL填料，25 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris）-盐酸（pH7.5）为平衡液，150 mmol/L醋酸（pH2.8）为洗脱液；pH3.5灭活1 h；以Sepharose QFF为阴离子填料，最大DBC 60 mg/mL 填料，50 mmol/L Tris-醋酸（pH7.5）为平衡液；SP HP为阳离子填料，上样量21.9 mg/mL，100%缓冲液A（10 mmol/L柠檬酸，pH5.5）—100%缓冲液B（10 mmol/L柠檬酸+1 mol/L NaCl，pH5.5）线性洗脱20柱体积；以Viresolve Pro为除病毒过滤器；采用PLCTK 30 kDa超滤膜包（C流道）超滤透析浓缩至（40.00±5.00） mg/mL，并以等体积方式10倍体积置换成原液缓冲液后除菌过滤；单抗纯度和杂质含量均符合质量标准。结论 成功开发出抗RANKL单抗的纯化工艺，产品符合要求。

目的 建立并验证同时测定流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）中Triton X-100和聚山梨酯80（polysorbate 80，PS80）残留量的方法。方法 采用高效液相色谱（high performance liquid chromato-graphy，HPLC）-蒸发光散射检测器（evaporative light-scattering detector，ELSD）方法检测流感病毒裂解疫苗中的Triton X-100和PS80残留量，并对该方法的专属性、准确度、精密度、线性、定量限和耐用性进行验证。结果 HPLC-ELSD法检测空白溶剂无色谱峰出现，混合标准溶液和供试品可见2个目标色谱峰，且与相邻峰的分离度大于1.5；Triton X-100和PS80样品的不同浓度加标回收率分别在90.0%~105.0%和80.0%~105.0%；同一实验员重复进样6次，TritonX-100和PS80残留量的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为0.7%和1.4%；由2名实验员在不同工作日检测Triton X-100和PS80残留量的RSD均不高于5.0%；Triton X-100质量分数在0.010%~0.100%范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，定量限为0.010%。PS80质量分数在0.006% ~0.060%范围内，浓度与峰面积呈线性关系，定量限为0.003%。结论 成功建立了流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）中Triton X-100和PS80残留量的HPLC-ELSD检测方法，该方法具有良好的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。

生殖器疱疹由单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）感染所致，在世界范围内广泛流行。HSV可在宿主体内建立终身潜伏感染，并引起严重的复发性疾病。此外，HSV感染还能明显增加HIV感染的机率。虽然目前抗HSV药物有一定作用，但是不能防止潜伏HSV复活。因此, 亟需研制有效的疫苗来控制HSV感染、限制疾病传播和复发。此文对生殖器疱疹的病原学、流行病学及疫苗的研究进展做一综述。

目的 建立毛细管区带电泳方法，检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量和多糖分子大小分布。方法 建立检测4种多糖的毛细管区带电泳方法，并探究最佳分离电压和温度。通过单次实验同时表征4种多糖，分别检测4种多糖含量以及多糖分子大小分布，并验证方法的线性、准确度、重复性和专属性。结果 当4种多糖的含量在0.081 3~0.487 5 μg/μL之间时，毛细管区带电泳方法线性良好，决定系数＞0.98；检测低、中、高3个浓度样品，回收率在95%~110%，6次实验相对标准偏差＜2.0%，在目标峰位置无杂峰出现。结论 毛细管区带电泳法检测4种脑膜炎球菌多糖具有良好的线性、准确度、重复性、专属性，适合A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量和多糖分子大小分布的检测。

WHO技术报告系列（Technical Report Series, TRS）为生物医药行业提供了重要的技术指南，涵盖了从产品研发、临床试验到商业化生产、分销运输以及退市全生命周期的技术规范和标准，指导企业建立全面的知识体系，确保其产品符合国际标准。此文介绍了WHO TRS 的来源、编号原则、对生物医药行业的指导意义和TRS本身面临的挑战，从质量管理、厂房与设施、质量控制、生产管理、储存与分销以及核查等方面，汇总罗列了相关的TRS，并对各板块作简要介绍；根据多年的质量管理和WHO预认证的实战经验和体会，分享了如何有效学习WHO TRS，以指导企业的全面质量管理工作和加速企业WHO 预认证项目。

目的 采用合成生物学的原理与方法，将自行构建的融合蛋白重组人IFNα2b（recombinant human IFNα2b，rhIFNα2b）-TNFα刺激基因6（TNFα stimulated gene 6，TSG6）在BL21大肠埃希工程菌中高效表达，并检测其抗炎、抗病毒活性。方法 采用Swiss-model软件同源建模法在线预测该融合蛋白的三级结构等；将经密码子优化的人IFNα2b与TSG6基因片段通过连接肽连接，构建成含rhIFNα2b-TSG6融合基因的pET-32a重组质粒，转化至E. coli BL21(DE3)菌株，经发酵、包涵体变复性及纯化后获得融合蛋白rhIFNα2b-TSG6。采用SDS-PAGE对其纯度和蛋白含量进行分析，并通过蛋白质印迹检测蛋白特异性。采用WISH/水疱性口炎病毒活性检测系统，以微量细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性。在小鼠巨细胞病毒感染肝炎模型中观察该融合蛋白对肝细胞的保护作用及对IL-1β mRNA水平的抑制。测试rhIFNα2b-TSG6在家兔体内的药代动力学。结果 生物信息学分析结果显示，rhIFNα2b-TSG6符合设计预期。经鉴定，该基因成功以包涵体形式表达出目的蛋白，蛋白质表观相对分子量约为68 000，表达量达30%~40%。纯化后的rhIFNα2b-TSG6纯度达90%，能分别与抗人IFNα和抗人TSG6单克隆抗体特异性结合；其抗病毒比活性为（1.80±0.16）×10⁶ 国际单位/mg，约为单独rhIFNα2b的3.5倍。在小鼠病毒感染肝炎模型中起到明显抑制炎症、保护肝脏的作用。在家兔中血药浓度于24 h达到峰值。结论 在大肠埃希工程菌中高效表达了有明显抗病毒抑炎活性的rhIFNα2b-TSG6，为融合蛋白的规模化生产及临床治疗病毒性疾病打下基础。

目的 评估人凝血因子Ⅸ（human coagulation factor Ⅸ, FⅨ）在血友病B患者中单次静脉注射的药代动力学参数，并初步分析其临床意义。方法 在1项单臂、开放标签、多中心临床试验研究中，13例25～64岁男性血友病B患者在非出血状态下接受FⅨ 50 国际单位(international unit, IU)/kg单次静脉注射，给药前2 h及给药后15、30 min和1、3、9、24、48、72、96 h采血检测FⅨ活性，采用非房室模型计算FⅨ的药代动力学参数。给药后30、90 d检测患者的FⅨ抑制物。结果 FⅨ单次静脉注射15 min～1 h后，所有患者血浆FⅨ浓度达到峰值（51.5～69.3 IU/dL）。根据FⅨ基线水平校正的药代动力学参数（均值±标准差）为：达峰时间（0.37±0.22） h，消除半衰期（29.732±4.576） h，峰浓度（58.3±5.3） IU/dL，清除率（0.028±0.006） dL/kgh，血药浓度-时间曲线下面积（零时至最后时间点）（1 626.189±285.365） %h，增量回收率（1.166±0.106） IUdL^-1/IUkg^-1。给药后1 h，所有13例患者的FⅨ活性在40%～60%；给药后3 h，有12例患者FⅨ活性维持在40%～60%；给药后9 h，仍有8例患者FⅨ活性处于40%～60%。13例患者均未检测到FⅨ抑制物。结论 血友病B患者在单次静脉注射FⅨ 50 IU/kg后，主要药代动力学参数，如消除半衰期及清除率等的结果表明其能在体内维持有效的血药浓度，此结果可用于进一步临床研究以评估替代治疗的疗效。

目的 分析青岛市预防乙型肝炎（乙肝）病毒母婴传播措施的阻断效果，探讨相关影响因素。方法 以青岛市2021年完成分娩的869例乙肝病毒感染产妇及其生产且完成乙肝血清学标志物检测的儿童（乙肝暴露儿童）为研究对象，通过随访及问卷调查，获得乙肝母婴传播率及家长对乙肝母婴传播知识的知晓情况，以单因素和多因素逻辑回归方法分析阻断失败的影响因素。结果 共调查乙肝暴露儿童869名，乙肝母婴传播率为0.69%。乙肝暴露儿童未完成全程乙肝疫苗接种〔比值比（odds ratio,OR）=0.030，95%置信区间（confidence interval，CI）：0.004~0.232〕和母亲胎膜早破（OR=9.570，95% CI：1.343~68.201）可能是导致乙肝母婴传播的独立危险因素。乙肝病毒表面抗原研究组和对照组儿童家长对妊娠期必要性用药可以减少母婴传播风险、乙肝暴露儿童接种全程乙肝疫苗后需要进行检测、乙肝疫苗接种流程、接种次数以及乙肝暴露儿童出生后的干预阻断措施知晓情况存在差异。结论 加强孕期保健、减少胎膜早破的发生、对乙肝暴露儿童出生后及时实施联合免疫策略和全程疫苗接种程序，可显著提升母婴阻断效能。针对重点人群加强宣教、提高预防乙肝相关知识的知晓率是降低乙肝母婴传播的有效途径。

目的 通过对变更稳定剂的乙型脑炎减毒活疫苗进行SD大鼠长期毒性试验，评价疫苗的非临床安全性。方法 分别向160只SD大鼠皮下注射3次变更稳定剂前后的乙型脑炎减毒活疫苗或氯化钠注射液（阴性对照），对动物进行临床观察，体重、食量、血细胞计数、血液生化、体温、临床病理、T淋巴细胞亚群和特异性IgG抗体的检测及尿液分析、眼科检查。结果 实验期间，动物未见明显与给药相关的异常反应。虽然部分疫苗组别与阴性对照组相比，体重增长、食量、血细胞计数、血液生化指标差异均有统计学意义（t=2.03~4.26，P =0.011~0.042），但未见与稳定剂变更相关的异常改变，体温、凝血功能、T淋巴细胞亚群未见具有统计学意义的改变（t=1.35~1.98，P =0.052~0.186）。至恢复期结束时，所有疫苗组的所有动物仍可检测到抗体，各抗体效价未见明显降低。末次给药后3 d和恢复期结束时，阴性对照组及所有疫苗组安乐死动物的大体观察、组织病理学检查均未见明显异常改变。变更前后疫苗的毒性反应、局部刺激性和免疫原性未见明显不同。结论 变更稳定剂后的乙型脑炎减毒活疫苗的大鼠长期毒性试验结果符合动物安全性评价要求。

目的 分析肠道病毒71型（enterovirus A71，EV-A71）灭活疫苗上市后我国手足口病（hand foot mouth disease，HFMD）的病原体、重症病例及人群分布特征情况，为HFMD的预防及控制提供参考。方法 纳入中国知网中2016—2025年公开发表、明确涉及EV-A71疫苗应用效果评价且包含疫苗应用前后病原体的变化、重症病例或发生率、人群分布特征等基础数据的文献，采用卡方检验对其结果进行综合分析。结果 EV-A71灭活疫苗推广使用前、后，HFMD病例的人群分布均表现为散居儿童占比最高、幼托儿童次之、学生及其他人群占比最低；EV-A71疫苗应用后，散居儿童在HFMD病例中的构成较疫苗应用前下降了11.35%，幼托儿童增加了25.62%，学生及其他占比增加了61.38%，疫苗应用前后3组人群分布差异均具有统计学意义（χ²=15 659.45、11 208.25、3 587.36，P<0.001）。EV-A71疫苗推广使用后，EV-A71所致HFMD病例平均减少了56.17%，而柯萨奇病毒A组16型（coxsackie virus A16，CVA16）及其他肠道病毒所致病例平均分别增加了8.08%和62.37%，差异均有统计学意义（χ²= 41.94、310.80、39.37，P<0.001），非EV-A71肠道病毒（如CVA16、CVA6及CVA10等）成为优势病原体。疫苗应用后，重症病例平均减少了42.70%、重症病例中EV-A71所致者占比下降17.89%，差异均有统计学意义（χ²=4 087.32、4 215.92，P<0.001）；疫苗使用后仍有约59%的重症病例由EV-A71感染所致，提示EV-A71依然是导致危重型HFMD的最主要病原体。结论 EV-A71疫苗极大降低了HFMD的重症发生率，EV-A71仍然是导致重症病例的主要病原体，同时CVA16、CVA6及CVA10等非EV-A71肠道病毒已经成为优势病原体。

目的  评估人凝血因子Ⅷ（human coagulation factor Ⅷ，hFⅧ）的溶血性和血管刺激性。方法  以家兔为实验动物，对hFⅧ进行体外溶血和体内血管刺激性实验。结果  在3 h体外实验期间未观察到兔红细胞发生溶血和凝聚。当以40 IU/kg 剂量的hFⅧ对家兔进行静脉注射时，未观察到家兔耳缘静脉的血管刺激性反应。结论  静脉注射推荐剂量的hFⅧ不会发生溶血和血管刺激反应。

目的 探讨平行性检验在未涉及生理活性生物体的ELISA四参数模型和平行线模型数据分析中的应用。方法 在未进行平行性检验的2种ELISA，肠道病毒71型体外相对效力插值法检测的四参数模型和肠道病毒71型抗原含量检测的平行线模型中，选取不同水平供试品检测数据，对不进行平行性检验获得的结果、平行性检验后偏离平行不显著的结果、平行性检验后偏离平行显著的结果进行一致性比较。结果 不同的数据分析模式均未导致结果波动，变异系数为2.9%~17.9%；将四参数模型插值法与偏离平行不显著结果、插值法与偏离平行显著结果进行配对t检验分析，除插值法与偏离平行显著结果对比中2.0水平P<0.001（t=0.11）外，其他组差异均无统计学意义；将平行线模型原始计算方法结果分别与偏离平行不显著结果和偏离平行显著结果进行配对t检验分析，差异均无统计学意义。结论 无论平行性检验偏离平行显著与否，其计算结果均与原始计算结果一致，经过数据分析模型筛选、进行过完整的方法学验证的ELISA，能够选择性使用平行性检验。

骨损伤是临床常见病，现有的临床治疗方法对一些骨损伤疑难病症治疗效果不佳。骨组织工程学的研究成果可提供解决该问题的新方案。当前应用较为成熟的骨组织工程损伤修复方法之一是骨髓间充质干细胞移植治疗技术，该细胞的临床应用还存在若干问题，如种子细胞来源困难、缺乏同种异体干细胞种子细胞或通用型种子细胞等。近期研究发现，外周血单核细胞不仅具有多向分化的潜能，同时增殖能力强且材料易得，可作为骨损伤修复的优选替代材料。此文综述了单核细胞及其在骨损伤修复中发挥的作用及作用机制，以期为骨损伤患者提供更加有效且无毒副作用的新治疗方法，提高其生活质量。

目的 建立13价肺炎球菌结合疫苗解吸附处理总蛋白含量测定方法并验证。方法 13价肺炎球菌结合疫苗经解吸附处理，利用Lowry法对其总蛋白含量进行测定，对建立的方法进行线性、准确度、重复性及耐用性验证。结果 适宜的解吸附条件为加入10%体积的0.3 mol/L NaOH。在蛋白标准品40~200 μg/mL范围内，标准曲线线性良好，决定系数>0.995； 20、40、60、80、120 μg/mL的蛋白标准品回收率在95.25%~104.77%之间，方法准确度良好；样品在不同时间重复测定6次的实验结果相对标准偏差为3.82%，方法重复性良好；解吸附后室温下分别放置15和30 min，测定结果之间差异无统计学意义（t值分别为0.059和0.238，P值>0.05），且测定结果的相对标准偏差分别为4.82%和5.14%，方法耐用性良好。结论 建立的方法可有效、准确、稳定地检测13价肺炎球菌结合疫苗中总蛋白含量。

2型糖尿病是全身性胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能减退的内分泌代谢性疾病。目前，2型糖尿病患者以代谢紊乱的复合型肥胖患者居多。司美格鲁肽是胰高血糖素样肽-1受体激动剂，可通过多重机制，如抑制食欲、延缓胃排空、改善胰岛功能等实现血糖控制与体重减轻，在2型糖尿病治疗领域应用广泛。此文对司美格鲁肽治疗2型糖尿病的作用机制、研究进展、临床应用中遇到的问题及建议等进行综述，旨在为其临床应用提供参考。

目的 建立柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16，CV-A16)抗原ELISA定量检测方法，用于CV-A16疫苗中抗原的定量检测。方法 以兔抗CV-A16多克隆抗体为包被抗体、辣根过氧化物酶标记的鼠抗CV-A16单克隆抗体为检测抗体，建立CV-A16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA，确定该方法的线性范围，并进行准确度、精密度、专属性及耐用性验证。用该方法检测CV-A16疫苗原液以及生产工艺各中间样品的CV-A16抗原含量，考查方法的适用性。结果 建立的ELISA方法线性范围为3.125~400.000 U/mL，决定系数在0.983 9~0.991 3，表明该方法线性良好；检测不同浓度的CV-A16国家抗原标准品，回收率在80%~120%，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）≤11%，准确度良好；不同抗原浓度的重复性和中间精密度测定结果的RSD均≤12%，精密度良好；与肠道病毒A组71型、CV-A10、CV-A6抗原以及CV-A16疫苗工艺中的其他成分均无交叉反应，专属性良好；针对不同影响因素设计耐用性试验，回收率均在80%~120%，RSD≤7%，耐用性良好；检测CV-A16原液和制备过程中的中间产品的抗原含量均具有良好的平行性和线性，表明该方法具有良好的适用性。结论 建立了CV-A16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA，可用于CV-A16灭活疫苗（Vero细胞）中抗原的定量检测。

疫苗派驻检查制度已实施5年多，对保障疫苗安全生产底线、提升企业GMP合规水平成效显著。随着我国深度参与国际药品监管体系（如国际人用药品注册技术协调会、国际药品检查合作计划），现行检查机制在国际接轨和专业能力建设方面需要进一步思考和完善。此文基于上海市疫苗派驻检查“四位一体”协同监管模式的实践和发展，从对标国际化、周密组织实施派驻检查、突出派驻检查重点、优化派驻检查策略等维度进行探讨，旨在构建更科学、高效的疫苗质量监管体系，持续提升监管效能。

 叶酸受体α（folate receptor α, FRα）是一种通过糖基磷脂酰肌醇锚定于细胞膜表面的单链糖蛋白，能够结合并转运叶酸到细胞内，而叶酸对于DNA合成、修复以及细胞代谢有着重要的作用。FRα在正常组织中限制性表达，但在上皮来源肿瘤组织中过度表达，并且表达量随肿瘤的进展而增高，因此可以作为治疗相关肿瘤的靶点。与叶酸结合的药物或者其他物质能够通过FRα介导的胞吞作用进入细胞发挥作用。靶向叶酸受体的单克隆抗体在肿瘤的诊断和治疗中也具有很好的前景。FRα的特异性组织表达可使单克隆抗体将细胞毒性物质送入肿瘤细胞而非正常组织，从而发挥杀伤肿瘤细胞或者抑制肿瘤进展的作用。

目的 探索84消毒剂对乙型脑炎病毒的灭活效果并建立检测方法。方法 依据2002年国家卫生健康委员会发布的《消毒技术规范》，采用悬液定量法，在实验室代表性材料（玻璃、彩钢、聚氯乙烯、不锈钢）表面进行消毒剂-病毒相互作用，通过中和鉴定实验确定合适的中和剂，建立检测方法检测病毒活性，并对检测结果进行评价。结果 常温下，中和剂卵磷脂（10 g/L）、吐温 80（10 g/L）及其中和产物均导致宿主细胞（原代金黄地鼠肾细胞）死亡；中和剂硫代硫酸钠（1 g/L）及其中和产物对宿主细胞无毒性，对细胞生长无影响，对乙型脑炎病毒毒力无影响。故选择硫代硫酸钠（1 g/L）作为中和剂。用84消毒剂对乙型脑炎病毒进行病毒灭活实验，用硫代硫酸钠（1 g/L）中和后，用噬斑法对该混合物进行检测，未检测到乙型脑炎病毒。结论 有效氯含量为800 mg/L的84消毒剂与乙型脑炎病毒反应5 min后即可有效灭活病毒，灭活效果达到预期。

目的 研究人凝血因子Ⅸ（human coagulation factor Ⅸ，FⅨ）制品的溶血性和血管刺激性。方法 根据国家药品审评中心发布的《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》规定，针对FⅨ产品，采用体外试管法评价药物的溶血性；采用同体左右侧自身对照法，经耳缘静脉注射1.6 mL/kg的FⅨ或生理盐水7 d，开展家兔刺激性实验。结果 FⅨ在50国际单位（international unit，IU）/mL的浓度下未引起溶血和红细胞凝聚反应；家兔给药及停药恢复期间，一般情况观察未见明显异常，血管刺激评分均为0分；家兔停药恢复14 d，血管刺激评分均为0分；家兔末次给药后96 h及停药恢复期14 d结束，病理得分均值均为0分。结论 50 IU/mL浓度的FⅨ对家兔不产生溶血性和血管刺激性。

近年来，双特异性抗体（双抗）通过提高免疫细胞靶向杀伤能力、阻断多信号通路产生协同作用等方式，在肿瘤免疫治疗领域呈现独特的治疗潜力。全球范围内，目前有＞200种用于抗肿瘤的双抗药物处于临床研究阶段，15种双抗获批用于治疗恶性血液肿瘤或实体瘤。双抗虽在恶性血液肿瘤中的治疗效果较好，但在实体瘤治疗中，如靶点选择、药物递送、安全性以及耐药性等方面仍面临诸多挑战。此文总结了已上市双抗在肿瘤治疗中的临床应用及研究进展，以为双抗药物的研发及临床应用提供参考。

作为分子生物学领域重要的核酸定量技术，数字PCR因其高灵敏度、高精确度以及高特异性等优势，近年来在病原体检测、基因编辑检测以及疾病诊断等领域得到了广泛应用。此文综述了数字PCR的基本概念、原理及其在生物检测领域的应用进展，以期为研究人员选择合适的检测方法提供参考。

目的 建立检测异嗜性小鼠白血病病毒（xenotropic murine leukemia virus，X-MuLV）的实时荧光定量反转录PCR（real time fluorescent quantitative reverse transcription PCR，RT-qPCR）方法，并进行验证及初步应用。方法 根据美国典型培养物保藏中心提供的X-MuLV基因组序列，设计特异性引物并构建包含靶序列的质粒和RNA片段；使用数字PCR定量并经连续稀释后作为标准品，建立RT-qPCR检测方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性、准确度、精密度和耐用性验证。应用建立的方法对纳米膜过滤及阳离子层析工艺去除逆转录病毒的能力进行评估，并与致细胞病变法的评估结果进行比较。结果 建立定量检测X-MuLV的RT-qPCR方法，该方法在2.5×10¹~2.5×10⁸拷贝/μL范围内线性良好，扩增效率为98%；检测灵敏度为2.5×10¹拷贝/μL；与实验室中其他常用病毒不发生交叉反应；重复性和中间精密度验证的变异系数均不高于1%；蛋白添加及缓冲液组分对样品中病毒检测结果不产生基质效应。应用该法检测纳米膜过滤工艺中指示病毒X-MuLV的去除率，处理前后病毒下降量≥4 lg 拷贝，可认定纳滤法能够有效清除病毒，结论与致细胞病变法检测结论一致。应用于复合式阳离子交换层析时RT-qPCR方法检测结果可反映病毒清除过程中病毒颗粒分布情况。结论 建立的RT-qPCR方法检测X-MuLV灵敏度、特异性、准确度、精密度和耐用性良好，适用于生物制品生产工艺的病毒清除验证工作。

目的 建立并验证乙型脑炎减毒活疫苗猪胰蛋白酶残留量ELISA检测方法。方法 应用双抗体夹心ELISA建立乙型脑炎减毒活疫苗猪胰蛋白酶残留量的检测方法，对该方法的准确度、重复性、中间精密度、耐用性、线性、专属性、检测限和定量限进行验证。结果 供试品的加标回收率为92.23%~118.16%。同批供试品的变异系数（coefficient of variation，CV）为6.6%~12.1%。不同实验人员、不同实验日期、不同批次试剂盒检测同批供试品的CV分别为8.1%~11.5%、6.7%~8.5%、8.4%~9.6%。在（37±1） ℃温度范围内供试品回收率差异无统计学意义（F=0.43，P=0.662）。在3.12~200.00 ng/mL范围内线性关系良好，决定系数均大于0.98。方法与供试品基质无交叉反应。检测限和定量限分别为1.25 和3.12 ng/mL。结论 建立的方法准确度、重复性、中间精密度、耐用性、线性、专属性良好，适用于乙型脑炎减毒活疫苗猪胰蛋白酶残留量的检测。

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis, AS）是主要侵犯骶髂关节、脊柱及临近肌腱、软组织的慢性自身免疫性疾病。AS的典型病理演变含免疫炎症驱动应答、骨破坏与新骨形成等环节，这些环节在同一部位反复发作，最终导致关节逐渐僵直变形。此文从IL-17在AS中的致病机制、调控作用以及研究现状等方面进行论述，阐明IL-17作为靶点在AS治疗中的优势，为IL-17相关药物的开发以及AS的治疗奠定基础。

目的  构建表达长效胰高血糖素样肽1（glucagon-like peptide 1，GLP-1）受体激动剂重组Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)融合蛋白的质粒载体，并研究该融合蛋白的活性。方法  将编码Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)的重组基因插入表达载体pOptiVEC™-TOPO^®来构建重组质粒Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)-pOptiVEC™-TOPO^®。将构建的重组质粒转染CHO/DG44细胞并收获表达产物后，分别用亲和层析法和免疫印迹法对表达产物进行纯化和检测。通过胰岛素释放实验确认重组融合蛋白对INS-1细胞胰岛素分泌的影响，同时在CD1小鼠中研究该融合蛋白对血糖的调节作用。结果  转染重组质粒的CHO/DG44细胞可成功表达Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)。蛋白质印迹法检测显示，纯化的表达产物的相对分子质量（M_r）与预期相符（重组融合蛋白单体和二聚体的M_r分别约为35 000和70 000）。胰岛素释放实验表明，在葡萄糖浓度恒定的情况下INS-1细胞分泌的胰岛素量随重组融合蛋白浓度的升高而增加。CD1小鼠实验显示，重组融合蛋白对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血糖具有调节作用，Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)处理的糖尿病小鼠的血糖明显低于对照糖尿病小鼠（F=3194，P＜0.01）。结论  Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)具有天然GLP-1的活性，可作为GLP-1受体激动剂用于2型糖尿病的治疗。

目的 对商业化规模生产场地变更前后的口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）进行单次给药毒性和重复给药毒性实验，以考察非临床安全性的可比性。方法 分别采用商业化规模生产场地变更前后的轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞），对SD大鼠以6 mL/只的剂量（临床拟用剂量为2.0 mL）经口灌胃给药，评价疫苗急性毒性。分别以2 和6 mL/只的剂量于第1、15、29、43天重复灌胃给药4次（恢复期4周），评价疫苗长期毒性。结果 单次给药毒性实验中，生产场地变更前后的疫苗最大耐受量均为6 mL/只，按体重折算，为人拟用剂量的50~200倍；变更前后疫苗组的动物第0—14天体重增长和日进食量均值均与同期对照组相近，分别为每只33~44 g（雌）、109~123 g（雄）和18~20 g（雌）、25~29 g（雄）。重复给药毒性实验中，未观察到不良反应的剂量水平为6 mL/只，低、高剂量组变更前后疫苗的动物体重、日进食量均值和体温的变化趋势均与同期对照组相似；实验动物的血液与生化指标也均未见与生产场地变更相关的异常改变。在同等给药剂量下，各疫苗卫星组血清IgG抗体的阳转率差异（P值为0.474~1.000）和几何平均滴度差异（t值为0.05~0.85，P值为0.442~0.965）均不具有统计学意义，且变化趋势一致；变更前低、高剂量疫苗卫星组血清IgG抗体阳转率和几何平均滴度（1∶lgx）最高水平分别为80.0%、80%和1.61、1.81，变更后分别为90.0%、100.0%和1.79、1.91；实验动物脏器及组织病理学切片均未见与生产场地变更相关的异常改变。结论 商业化规模生产场地变更前后的口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）在SD大鼠体内均显示出良好的安全性，二者的单次给药毒性和重复给药毒性均具有可比性。

目的 比较胰蛋白酶及胰蛋白酶类似物TrypLE对Vero细胞、2BS细胞、MDCK细胞的消化效果，以确定其在细胞培养及消化中的适用性。方法 分别用胰蛋白酶和TrypLE消化Vero细胞、2BS细胞、MDCK细胞，分析细胞消化时间、分散效果、消化残留情况、细胞计数、细胞活率，比较不同消化酶消化效果。将消化后细胞分别接种至细胞工厂和篮式生物反应器中进行培养，培养期间每天观察细胞工厂中细胞的形态以及汇合度，检测篮式生物反应器中细胞的贴附效果及葡萄糖消耗量。结果 使用胰蛋白酶和TrypLE消化Vero细胞及2BS细胞时，在消化时间、细胞计数及细胞活率方面差异均无统计学意义（t=﹣0.46~3.46,P=0.074~0.885），分散效果、消化残留情况相似。使用TrypLE消化MDCK细胞的时间明显长于使用胰蛋白酶，差异有统计学意义（t=13.28，P＜0.01），且消化效果较胰蛋白酶差。3种细胞消化后在细胞工厂再培养时，均形态规则，汇合度良好。在篮式生物反应器再培养时，3种细胞3 h内贴附率均在80%以上，且葡萄糖总代谢量差异无统计学意义（t=﹣1.05~1.01，P=0.405~0.783）。结论 TrypLE可以替代胰蛋白酶用于Vero细胞和2BS细胞的消化过程，而胰蛋白酶对MDCK细胞的消化效果更好。

 柯萨奇病毒B组5型（coxsackievirus B5，CVB5）近年在中国引起多起手足口病和无菌性脑膜炎暴发。分子流行病学研究显示出现新型CVB5传播，从而给防控肠道病毒感染所致疾病带来了新的挑战。此文就CVB5的流行病学、进化特征、动物模型以及实验室诊断等方面的研究进行综述。