2024年, 第47卷, 第4期 刊出日期：2024-08-10
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 191-196. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20231008-00013目的 以癌胚抗原相关黏附分子5（carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5，CEA）作为靶点，构建靶向于CEA的噬菌体单链抗体（single-chain fragment variable，ScFv）免疫库，并通过筛选获得靶向该抗原的抗体。方法 通过分子克隆的方法将小鼠脾脏中的抗体序列与噬菌体质粒构建获得重组噬菌体质粒，并经电转化导入大肠埃希菌TG1菌株中，再使用M13KO7辅助噬菌体拯救的方法，从TG1菌株中获得多样化的噬菌体抗体库。使用体外噬菌体库固相亲和筛选的方法，以CEA蛋白为靶点筛选获得高亲和力抗体。结果 成功构建了鼠源抗CEA噬菌体ScFv免疫库，经计算库容量为1.02×108 CFU，并通过筛选获得了靶向CEA的ScFv。结论 利用噬菌体展示技术，筛选了靶向CEA的抗体，为该靶点抗体的筛选奠定基础。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 197-202. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230912-00009目的 研究在特定的储存条件下，细胞工厂工艺生产的麻疹病毒原液和含麻疹成分疫苗中麻疹病毒滴度随温度、时间的变化规律。方法 按照细胞工厂工艺分别制备3批麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液，将麻疹病毒原液置于2～8 ℃保存21 d和–60 ℃以下保存15个月进行稳定性分析，并将同批次原液分别用于配制6批麻疹减毒活疫苗（measles attenuated live vaccine，MV）、麻疹-腮腺炎联合减毒活疫苗（measles and mumps combined attenuated live vaccine，MM）和麻疹-腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗（measles, mumps and rubella combined attenuated live vaccine，MMR），对上述18批疫苗进行（25±2） ℃保存6个月加速稳定性试验及2～8 ℃保存30个月长期稳定性试验。检测原液以及成品的麻疹病毒滴度，分析不同产品中的麻疹病毒在不同储存温度下的稳定性，并应用Minitab 17分析软件预估原液和成品稳定期。结果 3批麻疹病毒原液于2～8 ℃保存21 d和–60 ℃以下保存15个月，麻疹病毒滴度最低值分别为5.5和5.8 lgCCID50/ml，均符合≥5.3 lgCCID50/ml的质量标准。18批疫苗于（25±2） ℃保存6个月，MV、MM和MMR的麻疹病毒滴度最低值分别为4.0、4.7和3.4 lgCCID50/ml；2～8 ℃保存30个月，MV、MM和MMR的麻疹病毒滴度最低值分别为4.4、4.5和3.8 lgCCID50/ml。上述成品稳定性试验中的麻疹病毒滴度均符合各产品的质量标准；应用分析软件预估的原液和成品稳定期均远超各产品批准效期。结论 细胞工厂工艺的麻疹病毒原液以及3种含麻疹成分疫苗中的麻疹病毒的稳定性良好。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 203-206. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240105-00002目的 建立检测重组戊型肝炎疫苗宿主DNA残留量的荧光染色法，并进行方法验证。方法 采用λDNA作为标准品建立标准曲线，重组戊型肝炎疫苗纯化后原液作为样品，进行线性、准确度以及精密度的验证。结果 该方法在1.250~80.000 ng/ml范围内有良好的线性，决定系数大于0.99；准确性验证中DNA残留量加标回收率在90.00%~110.00%之间，且加标回收率相对标准偏差均小于15.00%。重复性验证和中间精密度验证的相对标准偏差分别为6.62%和10.30%，均小于15.00%。结论 该方法快速、灵敏、准确，可以检测重组戊型肝炎疫苗宿主DNA残留量。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 207-211. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20231206-00022目的 研究重组胰蛋白酶替代动物源胰蛋白酶用于腮腺炎减毒活疫苗和麻疹减毒活疫苗生产的可行性。方法 根据动物源胰蛋白酶消化液活性计算所需重组胰蛋白酶浓度，选择0.10~0.25 mg/ml的重组胰酶处理鸡胚组织生产2种疫苗，以动物源胰蛋白酶为对z照，对细胞工厂活细胞总数、细胞贴壁率以及收获液的病毒滴度进行对比和统计学处理。结果 和动物源胰蛋白酶组相比，重组胰蛋白酶消化的鸡胚组织表观更细腻，细胞易于分散。选择0.20 mg/ml重组胰蛋白酶用于腮腺炎和麻疹减毒活疫苗的生产，每批鸡胚分散后的活细胞总数分别为1.19×1010和1.63×109，对照组分别为9.31×109和1.27×109；细胞贴壁率分别为63.01%和82.64%，对照组分别为53.90%和75.99%；病毒收获液的病毒滴度均在正常范围内。结论 0.20 mg/ml的重组胰蛋白酶可替代动物源胰蛋白酶用于腮腺炎减毒活疫苗和麻疹减毒活疫苗的生产。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 212-216. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240118-00004目的 研制丙型肝炎病毒核心抗原（HCV core antigen, HCV-cAg）磁微粒化学发光法（chemiluminescence microparticle immunoassay, CMIA）的检测试剂，并初步评价其性能。方法 采用2株抗HCV-cAg单克隆抗体（单抗）预先包被磁微粒，另2株抗HCV-cAg单抗用吖啶酯标记，制备双抗体夹心CMIA检测试剂；与ELISA试剂盒同时检测210例干扰物样本、1 158例健康人样本、140例HCV-RNA阳性样本和2套血清转换盘样本，鉴定研制试剂的特异性和灵敏度。结果 CMIA检测试剂的特异性为99.74%，ELISA试剂盒的特异性为99.57%，2种方法干扰物样本的阴性率均为100%；CMIA检测试剂的灵敏度为77.86%，ELISA试剂盒的灵敏度为62.14%，且CMIA检测试剂检出血清转换盘样本阳性的时间早于ELISA试剂盒。结论 成功制备了HCV-cAg CMIA检测试剂，该试剂的特异性好、灵敏度高，适用于HCV的早期筛查和临床辅助诊断。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 217-222. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240201-00006目的 通过比较3种淋巴细胞毒效价检测方法测定抗人T淋巴细胞免疫球蛋白免疫血清及原液样品的效价结果，阐明3种检测方法的相关性。方法 采用中国药典2020年版三部淋巴细胞毒效价检测方法、基于人外周血单个核细胞的淋巴细胞毒流式检测方法及基于人白血病T细胞株（Jurkat细胞）的淋巴细胞毒流式检测方法测定3批次免疫血清及3批次原液的效价。免疫血清稀释128、256及512倍进行效价检测，判定效价；原液稀释8～2 048倍进行检测，计算半数效应浓度。结果 中国药典方法与基于人外周血单个核细胞流式法检测3批次免疫血清的效价均为1:512；基于Jurkat细胞流式法检测001批次免疫血清的效价为1:512，002与003批次免疫血清d的效价为1:256。3种方法测定3批次原液的效价结果与阳性对照Grafalon的活性水平相当，不同方法检测的效价趋势基本一致。结论 虽然3种方法测定免疫血清与原液的效价结果趋势基本一致，但淋巴细胞毒流式检测方法操作更便捷，且可定量测定半数效应浓度值。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 223-229. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240204-00007目的 制备能特异识别蛋白质A的多克隆抗体（多抗），以构建快速、高效、准确的抗体药物中残留蛋白质A定量检测试剂盒。方法 使用标准蛋白质A样品进行动物免疫，获得特异性识别蛋白质A的兔多抗；标记兔多抗并进行抗体配对测试，构建夹心ELISA试剂盒，优化试剂盒检测样品的处理方法，并对试剂盒的稳定性、耐用性、钩状效应、适用性等进行验证。结果 多抗制备前对蛋白质A进行热处理11 min时释放率最高，1#多抗作为包被抗体和2#-Bio作为检测抗体组合构建的试剂盒能够准确检测出蛋白质A，灵敏度达0.03 ng/ml，在4 ℃条件下可保存1年。不同反应时间、不同反应温度下的标准曲线的决定系数均大于0.99。检测7款产品的回收率均在80%~120%之间，对应标准曲线的决定系数均大于0.99。高浓度测试试剂盒时所得光密度值高于标准曲线最高浓度10 ng/ml的值，待申报样品检测值与回算值一致。结论 成功构建了残留蛋白质A的残留定量检测试剂盒，该试剂盒的稳定性、耐用性、适用性良好，且无钩状效应。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 230-237. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240218-00008汉坦病毒（hantavirus，HV）感染可引起急性传染病肾综合征出血热和汉坦病毒心肺综合征，在世界各地均有流行且致死率较高，成为了全球性公共卫生问题。目前尚无针对HV的特异性治疗药物或方法，接种疫苗成为预防未来大流行的有效、经济手段。目前HV疫苗主要有灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗、病毒样颗粒疫苗、DNA疫苗等，主要将包膜糖蛋白和核衣壳蛋白作为免疫原，诱导机体免疫系统产生体液免疫应答和细胞免疫应答清除HV感染细胞。此文对国内外各种HV疫苗及其优缺点、作用机制、研究进展等进行简要综述。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 238-244. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230705-00058蛋白质纳米颗粒作为抗原展示载体，与天然病原体大小相似，能够有效帮助抗原提高其稳定性和免疫原性。临床试验研究表明，蛋白质纳米颗粒可被应用于新型疫苗的开发。此文对蛋白质纳米颗粒疫苗的免疫学特性，以及蛋白质颗粒在疫苗研发中的应用进行综述，旨在为蛋白质纳米颗粒的进一步研究提供参考。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 245-251. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230912-00008沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis, CT）的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症，然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3（plasmid gene protein 3，Pgp3）的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生殖道输卵管的病变，表明Pgp3在CT致病中起重要作用。Pgp3通过抑制宿主细胞凋亡、改善宿主细胞生存状态以及抑制人类抗菌肽等多种机制，维持CT生存并促进其感染上行。Pgp3还可通过促进CT转移并定植于胃肠道，建立CT的持续感染。此外，Pgp3通过诱导产生炎症因子等方式促进炎症的发生发展。因此，Pgp3是CT致病的重要毒力因子。此文就Pgp3对CT致病机制的研究进展作一综述。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 252-259. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20231013-00014IL-32是广泛表达于人体各组织的细胞因子，具有9个亚型。研究发现，IL-32可通过多种途径调控免疫细胞及其他细胞功能，协同多种细胞因子参与炎症的发生发展,直接或间接地发挥促炎或抑炎的作用。IL-32对肿瘤的发生、侵袭及迁移也有重要的影响，其作用的差异可能与IL-32的亚型及复杂的肿瘤微环境差异相关。此文旨在阐释IL-32在炎症和肿瘤中的作用及相关机制。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(4): 260-268. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20231115-00018间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）源性外泌体（MSC derived exosome，MSC-Exo）是由MSC通过旁分泌作用产生的携带大量生物信息传播介质和活性物质的脂质双分子层包裹纳米级囊泡，可实现有选择性、定向性的细胞间信号转导，抑制炎症反应，促进受损组织的修复与再生。此文就MSC-Exo的生物学特性、作用机制及其在常见疾病治疗中的潜在应用与发展进行综述。
沪公网安备 31010502000696号