目的   原核表达C端截短的乙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis B virus core antigen，HBcAg）〔HBcAg(aa 1-149）〕，并研究其在小鼠中的免疫原性。方法   用聚合酶链反应扩增C端截去34个氨基酸的HBcAg基因片段，构建含HBcAg（aa 1-149）基因的克隆质粒及表达质粒，在大肠杆菌Rossatta2中以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白的表达。表达产物经Ni²⁺亲和层析柱纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、蛋白质印迹法鉴定。将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠，用ELISA法检测血清抗-HBc水平。结果   重组原核表达质粒pET15b HBcAg(aa 1-149)经双酶切和SDS-PAGE鉴定证明构建正确。重组HBcAg（aa 1-149）在大肠杆菌中获得高效表达，表达形式主要为可溶性蛋白。蛋白质印迹法显示在预期位置（相对分子质量约17 000位置）出现特异性条带。纯化后的重组蛋白纯度较高（＞90%），并可在小鼠中诱生较高水平的抗-HBc。结论   重组HBcAg（aa 1-149）在原核系统中获得成功表达，并可在小鼠中诱导抗体应答。

 目的  建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中黏着素（pertactin， Prn）的方法。 方法   纯化的Prn免疫家兔以制备高效价血清抗Prn抗体。辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗Prn多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记，建立双抗体夹心ELISA法。 结果   建立的方法与丝状血凝素和百日咳毒素无交叉反应，特异性较好。该ELISA法在1.25~80 .00 μg/L Prn测量区间有最佳线性，相关系数＞0.99。实验内和实验间检测64、32、16 μg/L Prn，变异系数为2.6%~7.7%，回收率为84.9%~95.5%，精密度和准确度均符合常规质控要求，因此该法的定量限度为16 μg/L。 结论   建立的ELISA法可有效检测百日咳疫苗纯化过程中的Prn含量，为组分百日咳疫苗质量控制奠定了重要基础。

目的  建立从天然百日咳杆菌中提纯百日咳杆菌黏着素（pertactin，PRN）的方法，研究PRN的生物学特性并确定PRN在无细胞百日咳疫苗中的作用。方法  百日咳杆菌CS株于发酵罐培养后，经热浸提、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析得到纯化PRN，根据《中华人民共和国药典》2005年版三部的要求，对纯化PRN进行纯度检测及生物学特性研究。结果  各项检测显示，纯化PRN的纯度在95%以上，其相对分子质量和等电点与标准PRN一致。纯化PRN对小鼠具有保护效力，且其保护效力随PRN免疫浓度的增加而增强。未检到纯化PRN的特异性毒性和异常毒性。结论  建立了从天然百日咳杆菌中提纯PRN的方法，而且纯化PRN具有免疫原性和保护效力。

目的  通过指数富集的配基系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）筛选能与高亲和力(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的适配子，并用该适配子建立双适配子夹心酶联寡聚核苷酸吸附试验（enzyme-linked oligonucleotide assay，ELONA）来对深部真菌感染血浆进行辅助诊断。方法  提取白色念珠菌ATCC10231株细胞壁(1,3)-β-D-葡聚糖，通过SELEX筛选获得能与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的高亲和力单链DNA适配子，并用该适配子建立双适配子夹心ELONA来检测深部真菌感染血浆中的(1,3)-β-D-葡聚糖。结果  从白色念珠菌细胞壁中成功提取了高聚合度(1,3)-β-D-葡聚糖，并通过体外酶解获得可溶性低聚合度(1,3)-β-D-葡聚糖作为筛选靶标。通过SELEX进行12轮筛选后，从初始单链DNA文库中获得2个高亲和力适配子AU1和AD1，检测发现这2个适配子并非结合于(1,3)-β-D-葡聚糖的同一表位。双适配子夹心ELONA法检测深部真菌感染血浆中的(1,3)-β-D-葡聚糖的特异性和灵敏度分别为91.94%和92.31%。结论  从初始单链DNA文库中成功获得可与(1,3)-β-D-葡聚糖特异结合的高亲和力适配子，为深部真菌感染新型诊断试剂的研发奠定了基础。

 目的  在大肠杆菌中表达具有生物活性的人胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor， GDNF）蛋白。方法  从人胶质瘤组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（reverse transcription PCR,RT-PCR）方法扩增出GDNF DNA片段，并将经双酶切后的GDNF基因片段直接与表达载体pET28a+连接，构建重组表达载体pET28a-GDNF，再将其转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达；采用分子筛层析法对表达产物进行纯化；用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对其纯度进行鉴定。结果  酶切和测序证实，PCR扩增出GDNF基因片段为GDNF成熟肽编码序列；表达产物的SDS-PAGE显示，相对分子质量16 000处有一新增蛋白带。结论  本研究所构建的原核表达系统可表达人GDNF。

目的  根据对小鼠血清抗体滴度检测和对豚鼠的保护力观察，评估鼠疫组分疫苗的免疫效果。 方法  通过氢氧化铝佐剂吸附15 μg F1、15 μg rV、15 μg F1+15 μg rV抗原，分别制成鼠疫单组分疫苗和双组分疫苗。采用2剂（0、2周）皮下接种途径，分别免疫NIH小鼠和豚鼠。以皮上划痕人用鼠疫活疫苗1剂免疫作为对照。免疫6 周后，采用间接ELISA法检测小鼠血清IgG滴度，采用t 检验做组间比较。与此同时，使用强毒鼠疫菌141株对豚鼠进行皮下攻击，以观察疫苗效力。 结果  小鼠的血清抗体检测结果表明，鼠疫组分疫苗组血清F1抗体或/和rV抗体滴度均高于鼠疫活疫苗组，差异有统计学意义(t=3.041,3.472,15.958,16.264,P均值<0.01)。豚鼠攻击试验结果显示，F1+rV组的存活率可达到 90%（9/10）， 而F1组和rV组分别为50%（5/10）和20%（2/10）。结论  鼠疫F1+rV双组分疫苗是有效的抗鼠疫疫苗，而单组分F1或rV鼠疫疫苗不能有效防御鼠疫菌攻击。

目的  建立重组人白细胞介素-6（rhIL-6）包涵体精制工艺，获取高纯度的包涵体蛋白。 方法  采用超声破碎法和生物酶解法破碎细胞；摸索洗涤缓冲液中尿素的适当浓度，经多次洗涤获取高纯度的包涵体蛋白。 结果  成功建立了rhIL-6 包涵体蛋白的精制工艺；其中尿素浓度为2.0 mol/L，溶菌酶浓度达到0.8mg/g菌体。包涵体蛋白洗涤后纯度达到90%以上。 结论  说明该精制工艺合理，包涵体蛋白纯度达到90%以上，对rhIL-6复性至关重要。

目的  评价以1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸盐（1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate，CDAP）活化多糖制备的1型肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物原液的稳定性。方法  以CDAP作为活化剂，连续制备3批多糖-蛋白结合物原液，分别放置于（37±2）℃和2～8 ℃，定期取样检测，并评价其稳定性。结果  多糖-蛋白结合物原液在（37±2）℃条件下保存21 d，2～8 ℃条件下保存12个月，其主要检测指标均符合质量要求，游离多糖和游离蛋白含量分别低于30.0%和5.0%，分配系数≤0.35的多糖回收率均>65%。结论  确定了不同条件下1型肺炎球菌多糖-破伤风类毒素结合物原液的有效保存时间。

目的 用基因工程方法获得HIVp24蛋白编码区基因片段,构建重组质粒,并在大肠杆菌中高效表达目的 蛋白. 方法 设计带有酶切位点的引物,扩增p24基因,分别连接到pET-11c和pET-16b载体上,将两种表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达.选择离子交换层析和分子筛层析纯化p24. 结果 p24在大肠杆菌中高效表达,p24在非还原性电泳中呈单一条带,提示有较好的立体结构,p24-pET-16b的表达量占到总蛋白表达量的30%.经纯化后蛋白纯度达到90%以上.  结论 p24能在大肠杆菌中高效表达.

目的  研究采用过氧化氢法和高压均质法降解对6A型肺炎球菌多糖（type 6A pneumococcal polysaccharide，PnPS6A）结构和抗原性的影响。方法  分别采用过氧化氢法〔将过氧化氢加入多糖（polysaccharide，PS）溶液中，50 ℃反应3 h〕和高压均质法（用高压均质机在5×107 Pa压力下处理PS溶液）降解PnPS6A，降解物经超滤浓缩和冻干后，获得降解的PnPS6A。分别用核磁共振氢谱（nuclear magnetic resonance hydrogen spectrum，¹H-NMR）和双向免疫扩散法检测PnPS6A降解物的结构和抗原性，用抑制ELISA检测降解和未降解的PnPS6A的抗原一致性。结果  2种降解方法均能降低PnPS6A的相对分子质量。2种降解的PnPS6A对PnPS6A抗血清抑制的半数有效浓度与未处理的PnPS6A为同一个数量级，表明降解的PnPS6A的抗原性没有改变。¹H-NMR分析显示，2种降解的PnPS6A的结构与未处理的PnPS6A一致。结论  2种降解方法都能降低PnPS6A的相对分子质量，而且对PnPS6A的结构和抗原性不会产生影响。

目的  建立麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗（combined live attenuated measles，mumps，rubella and varicella vaccine，MMRV）的生产工艺。方法  根据现有疫苗病毒原液生产工艺，将麻疹病毒沪-191纯化株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRD-Ⅱ株和水痘-带状疱疹病毒Oka株在原代鸡胚成纤维细胞或人二倍体细胞MRC-5株中制备高滴度病毒原液，并超低温保存。筛选无明胶冻干稳定剂配方。按国外已上市同类产品的病毒配比，研究MMRV中4种病毒的原液配制滴度及成品配制比例，建立最佳冻干工艺。结果  用筛选出的适合于MMRV的无明胶冻干稳定剂配方进行试验，确定病毒原液的配制滴度为，麻疹4.6 lg半数细胞培养感染量（50% cell culture infective dose，CCID₅₀）/ml、腮腺炎5.8 lgCCID₅₀/ml、风疹4.3 lgCCID₅₀/ml、水痘4.8 lg噬斑形成单位（plaque forming unit，PFU）/ml。使成品中腮腺炎病毒滴度至少达到麻疹和风疹和水痘病毒的10倍，水痘病毒滴度高于现有单价水痘疫苗。连续制备3批MMRV，平均病毒滴度为，麻疹4.5 lgCCID₅₀/ml、腮腺炎5.1 lgCCID₅₀/ml、风疹4.3 lgCCID₅₀/ml、水痘4.6 lgPFU/ml；平均水分为1.2%。其他项目检定均合格。结论  建立了MMRV的生产工艺，可以稳定生产出达到国外同类产品质量标准并符合我国4种单价减毒活疫苗国家标准的产品。

目的  研究Sabin株脊髓灰质炎病毒（Sabin strain polio virus，sPV）纯化的离子交换层析（ion exchange chromatography，IEC）条件。 方法  在不同层析条件下对sPV凝胶层析粗纯液进行IEC，设定的层析参数分别为介质Q Sepharose FF或Eshmuno Q、上样量30%或40%柱体积、流速（150±5）或（240±8） cm/h。分别检测各型sPV纯化液的D抗原含量、蛋白浓度、病毒滴度、宿主细胞蛋白残留量和Vero细胞DNA残留量，计算D抗原回收率和比活。结果  Eshmuno Q IEC纯化的各型sPV纯化液的D抗原回收率均明显高于Q Sepharose FF IEC。在上样量40% 柱体积、流速（150±5） cm/h条件下，Eshmuno Q IEC纯化的各型sPV纯化液的D抗原比活均高于Q Sepharose FF IEC，差异均有统计学意义（Ⅰ型：t=4.23，Ⅱ型：t=5.73，Ⅲ型：t=4.18，P值均<0.05），而且前者的宿主细胞蛋白残留量（Ⅰ型：t=8.29，Ⅱ型：t=7.89，Ⅲ型：t=8.18，P值均<0.05）和Vero细胞DNA残留量（Ⅰ型：t=4.23，Ⅱ型：t=4.56，Ⅲ型：t=4.78，P值均<0.05）均低于后者，差异均有统计学意义。结论  用IEC纯化sPV进行纯化时，以Eshmuno Q代替Q Sepharose FF可增加上样量和流速，从而缩短IEC时间，提高纯化效率。

目的进行流行性感冒病毒裂解疫苗的病毒灭活检测,研究病毒灭活状况.方法将单价病毒液接种鸡胚尿囊腔,第二代鸡胚尿囊液检查不应出现血凝反应.结果半成品配制前,200批单价病毒液灭活试验全部通过,单价病毒液中较高的血凝素含量会影响灭活试验的判断.结论试验表明疫苗中无活病毒存在,生产过程中血凝素含量应适当控制.

 目的  用植物蛋白胨替代目前肺炎链球菌（pneumococcus，Pn）培养基中的动物蛋白胨，以保证生物制品的安全性。方法   比较大豆蛋白胨与胰蛋白胨的各种成分含量。分别以大豆蛋白胨和胰蛋白胨制备培养基进行9个型Pn大罐培养，比较两种培养基培养对Pn生长和粗制多糖含量的影响。 结果   大豆蛋白胨的总氮含量、氨氮含量和消化系数与胰蛋白胨相近，但大豆蛋白胨的总碳水化合物含量（336.20 μg/g）明显高于胰蛋白胨的总碳水化合物含量（10.56 μg/g）。植物源性培养基培养获得的各型Pn浓度（t＝3.851，P<0.05）和粗制多糖含量（t=3.853，P<0.05）明显高于动物源性培养基培养。 结论   植物蛋白胨可替代动物蛋白胨来制备Pn培养基。

目的  了解健康人群乙型肝炎（乙肝）疫苗接种情况，评价乙肝预防效果，为制定免疫策略提供依据。 方法  按照两阶段抽样法，在本市三区一县抽取8个行政村1~59岁常住人口2038人，进行问卷调查，并采集静脉血，用ELISA法检测乙肝血清标志物。 结果  乙肝疫苗调查接种率为50.54%，城市高于农村，低年龄组（98.14%）到高年龄组（0.95%）逐渐降低，男性高于女性。散居和托幼儿童接种率最高（96.58%和98.77%），学生次之（87.17%），农民最低（4.26%）。1~59岁人群HBsAg阳性率从低年龄组到高年龄组逐渐增高（0%~10.48%），抗-HBs阳性率为14.58%~50.18%，15-岁组最低（14.58%）。1990─2007年间乙肝报告发病率以1999年最高，为67.0660/10万，之后呈逐年下降趋势。2005─2007年平均乙肝报告发病率≤14岁人群低于4.6731/10万，≥15岁人群高于32.0789/10万。乙肝血源疫苗接种后HBsAg和抗-HBs阳性率分别为0.98%和39. 54%，与基因工程疫苗接种后阳性率（0.49%和43.28%）的差异无统计学意义。结论 应继续开展新生儿乙肝疫苗接种，推广成人接种，并将预防乙肝资源向农村倾斜。

目的  对A、C、Y和W135 4个不同血清群脑膜炎球菌菌株的16S rRNA、PorA和PorB基因进行序列分析，从分子水平对其做出鉴定。方法  提取脑膜炎球菌基因组DNA为
模板，设计特异性引物进行16S rRNA、PorA和PorB基因的PCR扩增并测序。结果  A、C、Y和W135群4个菌株的16S rRNA基因序列与GenBank中奈瑟菌属的脑膜炎球菌的同源性最高。4个菌株的PorA基因分型分别为P1.5-2,10; P1.7-1,1; P1.5-1,2-2; P1.5,2。PorB基因分别与porB3-26、porB2-40、porB3-100和porB3-25同源。结论  从基因水平分析表明4个菌株属于脑膜炎球菌，并在PorA和PorB基因分型上有差异。

目的  评价13价肺炎球菌结合疫苗（13-valent pneumococcal conjugate vaccine，PCV-13）在小鼠中的安全性及免疫原性。方法  将90只小鼠随机分为3组，分别免疫PCV-13、市售7价肺炎球菌结合疫苗（PCV-7）及生理盐水。于0、14、28 d分别进行皮下注射，观察免疫后小鼠的体重及状态变化至35 d。每组小鼠随机取10只在第14天时进行眼眶采血，其余20只在第35天采血。采血后进行血清分离于-40℃以下保存。用ELISA法检测小鼠血清抗各类型肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体水平。结果  PCV-13免疫小鼠体重增加未受到抑制，且未观察到其他不良反应，疫苗的安全性良好，3针免疫后，PCV-13免疫小鼠的抗各型多糖抗体滴度都有上升，表明PCV-13具有良好的免疫原性。PCV-13与已市售PCV-7对共同的7个血清型得免疫原性相同（t=0.004，p＞0.05）。结论  PCV-13在小鼠中具有良好的安全性和免疫原性，这为该疫苗的临床前研究提供了一定的理论依据。

目的 了解分别用Al(OH)3佐剂、生理盐水配制Hib结合疫苗和A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫持久性.   方法 分别用两种稀释液配制Hib结合疫苗和A、C群脑膜炎球菌结合疫苗,各自免疫小鼠,采集分离血清用ELISA测定血清IgG抗体滴度,计算血清抗体GMT和阳转率及不同免疫针次的免疫持久性.  结果 两种稀释液配制的Hib结合疫苗和A、C群脑膜炎球菌结合疫苗均可产生明显的抗体应答和免疫记忆反应,但在刺激机体快速产生免疫应答,加强免疫后的回忆反应,抗体滴度及免疫持久性方面有明显差异.生理盐水配制的结合疫苗较Al(OH)3盐水配制的结合疫苗可刺激机体快速产生抗体应答,但Al(OH)3盐水配制的结合疫苗具有更好的抗体GMT和免疫持久性.  结论 Al(OH)3盐水配制的结合疫苗具有较好的免疫原性.

目的  建立地高辛标记DNA探针杂交法，检测基于Madin-Darby犬肾（Madin-Darby canine kidney，MDCK）细胞生产的流感疫苗中宿主DNA的残留量。方法  提取MDCK细胞基因组DNA，制备地高辛标记探针。对地高辛标记DNA探针杂交法进行特异性、灵敏度及稳定性验证, 并用此法检测3批MDCK细胞流感疫苗中的DNA残留量。结果 MDCK细胞基因组DNA的质量浓度为33 ng/μl，260 nm与280 nm波长处的吸光度比值为1.9。制备的探针与非同源细胞DNA无杂交，最低检测限度为10 pg。探针在－70 ℃放置9个月后，检测灵敏度仍可达到10 pg。经检测，MDCK细胞流感疫苗成品中的DNA残留量＜10 ng。结论  建立的地高辛标记探针杂交法特异性强、灵敏度高、稳定好，并且操作简便，可用于MDCK细胞流感疫苗中DNA残留量的检测。

 目的  考察能否用单克隆抗体（单抗）替代多克隆抗体（多抗）血清检测23价肺炎球菌多糖疫苗中各型多糖的含量。方法   使用8个血清型（2、3、4、6B、9N、17F、18C、23F）的小鼠抗肺炎球菌荚膜多糖单抗和丹麦国家血清研究所（Statens Serum Institut, SSI）的兔血清多抗，以速率散射免疫浊度法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中相应血清型的多糖含量。通过重复性和专属性试验确定单抗的可用性。采用t 检验对单抗和多抗测定结果进行比较。结果   各型单抗与多糖标准品反应标准曲线的相关系数均>0.985 0。用单抗重复检测疫苗多糖3次，质量浓度为40.8～62.1 μg/ml，3次检测结果变异系数均<8.00%。各型多糖回收率为81.6%～124.2%。分别用8个血清型单抗检测其余各型多糖含量，结果均低于或接近于检测下限。单抗与SSI多抗血清的检测结果差异均无统计学意义，t 值为0.210 3～1.926 0，P 值均>0.05。结论   单抗检测重复性好、特异性高，与多抗血清检测结果相仿，因此，单抗可以替代SSI多抗血清用于测定23价肺炎球菌多糖疫苗中的多糖含量。

目的  建立麻疹腮腺炎减毒活疫苗生产用鸡胚的质量控制方法。方法  运用酶联免疫吸附测定检测禽白血病病毒；运用双向免疫扩散试验检测马立克氏病病毒、网状内皮组织增生症病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、多杀性巴氏杆菌；运用血凝试验检测血吸附病毒；运用逆转录-聚合酶链反应检测新城疫病毒；依照《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求进行无菌检查及支原体和外源因子检查。结果  采用上述方法未在无特定病原体鸡胚（鸡群代码：S、R、D、W、C、F、G、M、H）尿囊液、原代鸡胚成纤维细胞悬液、鸡胚成纤维细胞悬液培养物中检出禽白血病病毒、马立克氏病病毒、网状内皮组织增生症病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、多杀性巴氏杆菌、血吸附病毒和新城疫病毒，表明采用这些方法对麻疹腮腺炎减毒活疫苗生产用鸡胚进行质量控制是可行的。结论  建立了一套用于麻疹腮腺炎减毒活疫苗生产用鸡胚质量控制的快速、特异的检测方法。

目的  研究不同浓度葡萄糖对昆虫细胞sf 9生长特性及蛋白表达的影响。方法  将对数生长期的sf9细胞在含不同浓度葡萄糖的Hyclone无血清培养基(serum-free medium, SFM)中培养。采用台盼蓝拒染法监测细胞密度，分析比较不同浓度葡萄糖对sf9细胞生长特性的影响。然后，将对数生长期的sf9细胞在含不同浓度葡萄糖的Hyclone SFM中培养表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)18型L1蛋白。以蛋白印迹法鉴定并分析比较不同浓度葡萄糖对sf9细胞表达蛋白的影响。 结果  4个不同葡萄糖浓度实验组的细胞增殖速率及最大细胞密度均大于不加葡萄糖的对照组。两个较低葡萄糖浓度组的细胞凋亡率低于对照组，最高葡萄糖浓度组的细胞凋亡率则高于对照组。另外，加葡萄糖的8个实验组的蛋白表达量均高于不加葡萄糖的对照组，其中，3个较高葡萄糖浓度组显示有目的蛋白的降解条带。在另外5个没有出现降解条带的实验组中，以培养过程中间补加葡萄糖浓度至15 mmol/L的实验组蛋白表达量最大。结论  葡萄糖可促进sf9细胞增殖，不同浓度葡萄糖对细胞凋亡的影响不同；适宜浓度的葡萄糖可提高sf9细胞表达完整外源蛋白的量。

目的  对疫苗生产车间半成品配制区域的悬浮粒子进行动态监测和数据分析。方法  采用便携式悬浮粒子采样仪，于2016和2017年对乙型脑炎减毒活疫苗生产洁净车间进行日常悬浮粒子检测，其中A、B级洁净区域为班次检测，C级洁净区域为每周检测。对2年的检测数据制作单值-移动极差控制图，并进行t检验比较。结果  3个级别洁净区域的悬浮粒子数或均值如下，A级区≥0.5 μm的粒子数均<1，≥5.0 μm的粒子数均为0。B级区≥0.5 μm的粒子数均值：2016年为46.82（0～143.21），2017年为38.83（0～125.33）；≥5.0 μm的粒子数均值：2016年为2.52（0～7.83），2017年为2.41（0～7.15）。C级区≥0.5 μm的粒子数均值：2016年为214.64（0～679.16），2017年为209.81（0～619.31）；≥5.0 μm的粒子数均值：2016年为15.04（0～47.13），2017年为14.16（0～39.24）。3个洁净区域的悬浮粒子数均小于95%置信上限且均符合GMP范围要求。2016和2017年检测数据的差异无统计学意义（t值为0.14～1.02，P值均>0.05）。结论  疫苗生产车间半成品配制区的悬浮粒子动态监测结果符合GMP标准。

目的  研究建立符合《药品生产质量管理规范（2010年修订）》要求的生物制品生产厂房的设计确认（design qualification，DQ）文件。 方法   将生产厂房的DQ文件分为DQ方案和DQ报告。对工艺布局、生产厂房、净化空调系统、洁净暖房、洁净冷库DQ进行探讨。 结果   通过设计与确认，以文件和记录证明生物制品厂房的设计符合预定用途和药品生产质量管理规范。 结论   建立了符合药品生产质量管理规范的生物制品生产厂房的设计确认文件，为生产安全有效的生物制品奠定了基础。

目的  建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中破伤风类毒素（tetanus toxoid，TT）的方法。方法  TT免疫家兔以制备高效价血清抗TT抗体。辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗TT多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记，建立双抗体夹心ELISA法。结果  建立的ELISA法与丝状血凝素、百日咳毒素及白喉类毒素无交叉反应，特异性较好。该ELISA法在0.5~16.00 Lf/L TT测量区间有最佳线性，决定系数＞0.99。实验内和实验间检测14.0、12.0、6.0、3.0和1.5 Lf/L TT，变异系数为4.7%~9.8%，回收率为92.7%~109.0%，精密度和准确度均符合常规质控要求。该法的定量下限为1.5 Lf/L TT。结论  建立的ELISA法可有效检测破伤风疫苗纯化过程中的TT含量，为破伤风疫苗质量控制奠定了基础。

本文介绍了2001～2003年全球疫苗安全注射的现状,提出了存在的问题和改进意见.

 目的  确定同一批次4A分子筛干燥剂连续使用后，能达到预期灭菌除湿效果的有效次数。 方法  分别对无菌隔离器的手套系统（包括手套、封圈、套袖）以及实验舱和传递舱进行完整性测试。采用同一批次4A分子筛干燥剂连续灭菌除湿3次，通过对过氧化氢气体浓度、分布状态和灭菌效果，以及隔离器内部环境微生物（沉降菌、浮游菌、表面微生物）检测，验证过氧化氢对隔离器的灭菌效果；通过对4A分子筛干燥剂使用前后称重和观察舱内起雾现象，确定4A分子筛达到灭菌除湿效果的有效次数。结果  共对8个手套系统进行完整性测试，手套在60 s内的压降差值均<60 Pa；实验舱和传递舱的完整性测试结果表明，小时体积泄露率为0.04%，每次测量环境温度波动均<0.5 ℃。过氧化氢指示卡显示，舱内过氧化氢达到灭菌浓度且分布均匀。经生物指示剂检测，过氧化氢能杀灭106以上嗜热脂肪芽孢杆菌。隔离器内部环境微生物检测结果如下，沉降菌为每4小时 0 菌落形成单位（colony forming unit，CFU）、浮游菌为0 CFU/m3、表面微生物为0 CFU/碟。同一批次4A分子筛干燥剂使用前的重量为3.000 5 kg，第1、第2和第3次使用后的重量分别为3.185 0、3.340 5和3.451 5 kg。当同一批次干燥剂可连续使用至第3次时，隔离器舱内出现起雾现象。结论  同一批次4A分子筛干燥剂可连续使用3次能并到预期的灭菌除湿效果。

目的  调查分析目前国内常见养殖淡水鱼类肠道菌群对不同抗生素的耐药性现状。方法  选取两种常见养殖淡水鱼类的粪便标本，分别在添加了7种抗生素〔青霉素G、头孢呋辛钠、庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素和复方新诺明（SMZ）﹞的琼脂平板上进行培养，通过PCR法分析所获得的耐药菌株的16S rRNA基因序列并对其种属进行鉴定。采用χ²检验作两种鱼之间的比较。结果  筛选后共得到2956株耐药菌，对青霉素G、头孢呋辛钠、四环素、SMZ、庆大霉素、红霉素和环丙沙星的平均耐药率分别为8.89%、1.57%、0.28%、0.06%、0.08%、0.07% 和0.11%。用单纯随机法挑选71株耐药菌，培养鉴定后其主要组成为：气单胞菌31株（43.66%）、不动杆菌8株（11.27%）、假单胞菌6株（8.45%）、金黄杆菌6株（8.45%）。两种鱼肠道菌群对青霉素G、头孢呋辛钠、SMZ、红霉素和四环素的耐药水平差异有统计学意义（χ²值为129.06、212.54、7.76、8.62 和35.40,P值均<0.05）。结论 通过获得两种常见养殖淡水鱼类肠道菌群对7种抗生素（青霉素G、头孢呋辛钠、庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素和SMZ）的耐药率，为今后进一步研究和追踪常见淡水鱼肠道菌群耐药率的变化提供了基础。

目的  建立定量检测原代地鼠肾细胞（primary hamster kidney cell，PHKC）疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法  制备PHKC蛋白免疫家兔，对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶，通过优化各反应条件建立ELISA方法，同时进行方法学验证。结果  ELISA检测方法的最佳包被抗体质量浓度为6 μg/ml，酶标抗体工作浓度为1:2000，最佳检测区间为12.500～200.000 ng/ml，定量限度为23.250 ng/ml，准确度和精密度较佳。结论  建立了一种简单、准确、可靠检测PHKC病毒性疫苗中宿主细胞蛋白残留量的ELISA双抗体夹心法。

 目的  通过将鼠疫耶尔森菌的F1抗原和重组V抗原组成的鼠疫疫苗免疫食蟹猴，对疫苗的免疫效果进行评价。方法  将20只食蟹猴随机分成低剂量组、高剂量组和生理盐水对照组，分别于0和2周肌内免疫，并于首1剂后2周和2剂后2周采血。用ELISA检测免疫动物血清中的总IgG抗体；另外，分离外周血淋巴细胞，用酶联免疫斑点试验检测分泌IFN-γ的外周血淋巴细胞。用t检验对结果进行比较。结果  免疫后，对照组均未产生抗体，而疫苗组产生了较强的抗体应答。2剂免疫后2周，低、高剂量组的抗F1抗原IgG抗体几何平均滴度分别为（4.71±0.32）lg和（5.09±0.21）lg（t=-2.76，P<0.05），两组的抗重组V抗原IgG抗体几何平均滴度分别为（4.75±0.52）lg和（5.12±0.58）lg（t=-1.37，P>0.05）。经F1和V抗原体外刺激产生IFN-γ的外周血淋巴细胞，细胞数均无明显增加。F1抗原刺激后，低、高剂量组分泌IFN-γ的外周血淋巴细胞数分别为（1±1）/10⁶和（1±2）/10⁶（t=-0.16，P>0.05）。重组V抗原刺激后，两组分别为（7±15）/10⁶和（6±7）/10⁶（t=0.88，P>0.05）。结论  鼠疫疫苗在食蟹猴模型中能诱导较强的体液免疫应答，但不能诱导明显的细胞免疫应答。

目的 了解2004-2006年间鹰潭市民被狗、猫、鼠等动物咬、抓伤后接种狂犬病疫苗的效果.   方法   对被动物咬、抓伤者全程接种狂犬病疫苗后15～20 d以ELlSA方法测定血清抗狂犬病抗体.   结果 在全程接种狂犬病疫苗的961名被动物咬、抓伤者中,抗体阳性893人,阳性率为92.9%.≥60岁组与＜60岁组间的抗体阳性率差异有统计学意义(X2=5.716,P＜O.01).   结论   被动物咬、抓伤者及时接种狂犬病疫苗是控制狂犬病的重要手段.

目的  探索温度和光照强度对疫苗有效性监测卡（vaccine vial monitor，VVM）的影响，为VVM在疫苗存储、运输和使用环节的应用提供保障。方法  模拟实际运输储存环境，将VVM分别存放在同一温度不同光照强度、同一光照强度不同温度、及室外高温强光照条件下，测定VVM的光密度（optical density，OD）差值，根据其变化确定温度与光照对VVM颜色的影响。结果  VVM贴于疫苗瓶后，环境温度和光照均对其OD值有影响。VVM在高温和强光照环境下存放，OD差值出现明显下降。结论  生产厂家在使用VVM时，除温度外还应考虑光照条件，以确保VVM能真实反映疫苗的储存运输状况。

 目的   研究幽门螺杆菌黏附素 A（adhesin A of Helicobacter pylori，HpaA）基因在大肠杆菌中的表达和检测纯化 HpaA 的免疫原性。方法   将hpaA/pET28a表达质粒转入大肠杆菌BL21（RP）株并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达，通过Ni²⁺亲和层析和分子筛层析纯化表达蛋白。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表达蛋白的相对分子质量，用蛋白质印迹法对表达蛋白进行特性确认。将纯化HpaA腹腔注射Balb/c小鼠，并检测小鼠的抗体水平。结果   表达蛋白的相对分子质量约为30 000，与HpaA相符。纯化的表达蛋白可与抗HpaA抗体发生特异性反应。腹腔注射HpaA的小鼠与对照小鼠间的血清抗HpaA IgG抗体水平差异存在统计学意义（t=8.367，P<0.01）。结论   HpaA在大肠杆菌BL21（RP）株中得到成功表达，且纯化HpaA具有较好的免疫原性。

目的 研制白喉抗体定量试剂,用于白喉疫苗免疫后抗体水平监测.  方法 采用双抗原夹心法原理,用白喉抗体国家参考品为定量依据,建立ELISA定量检测系统.  结果 试剂经系统优化后,检测抗体浓度在10～120 IU/L之间,呈良好的线性关系(r=0.996).精密度(CV)≤4.6%.实际应用验证,用ELISA试剂对不同年龄组的检测结果显示,白喉抗体水平的变化趋势与国家计划免疫程序密切相关.在白喉疫苗效力检定中,用ELISA试剂直接测定免疫后小鼠的抗体水平与Vero细胞法测定结果之间具有良好的相关性(r=0.974).  结论 该试剂可用于白喉抗体的定量检测.

 目的  研究0.5%硫代硫酸钠、10%胰蛋白胨大豆肉汤（tryptic soy broth， TSB）培养基、10%Letheen肉汤培养基对实验室常用的4种消毒剂的中和效果，为疫苗生产和检定中科学选择中和剂提供依据。 方法  取生长良好的Vero细胞接种于96孔培养板，每组8个复孔，置于37 ℃、5% CO2培养过夜。将3种中和剂分别与杀孢子剂、0.5%“84”消毒液、酸性苯酸盐、碱性苯酚盐4种消毒剂中和后，接种于单层生长的Vero细胞，显微镜下观察细胞生长情况。结果  0.5%硫代硫酸钠分别与杀孢子剂、0.5%“84”消毒液中和后接种细胞，8孔细胞全部存活；而0.5%硫代硫酸钠分别与酸性苯酚盐和碱性苯酚盐的中和产物接种细胞后，细胞全部死亡。10% TSB培养基分别与酸性苯酚盐、碱性苯酚盐中和后接种细胞，8孔细胞全部存活；而10% TSB培养基分别与杀孢子剂和0.5%“84”消毒液的中和产物接种细胞后，细胞全部死亡。10%Letheen肉汤培养基接种细胞后，8个孔细胞全部死亡。结论  0.5%硫代硫酸钠可中和杀孢子剂和0.5%“84”消毒液的消毒作用，10%TSB培养基可中和酸性苯酚盐和碱性苯酚盐的消毒作用。10%Letheen肉汤培养对Vero细胞有毒性作用。

目的  鉴定1株在生物制品生产车间采集的菌株wh01的种属。方法   观察该菌株的形态，并用细菌鉴定仪进行检定。采用PCR法扩增菌株的16S rDNA和甲醇脱氢酶大亚基的mxaF基因，用生物信息学软件进行分析。结果  该菌株经细菌鉴定仪检定为沙门菌属，但其形态与沙门菌有很大差别，16S rDNA和mxaF 基因序列与甲基杆菌属序列的相似性高达99%。结论  该菌株属于甲基杆菌属。

目的  通过对国内多家疫苗生产企业进行GMP跟踪检查，分析缺陷项，评价国内疫苗生产企业的GMP管理现状。方法  按照国家食品药品监督管理总局（国家总局）药品化妆品监管司的年度检查计划，2016年国家总局食品药品审核查验中心派出检查员对36 家疫苗企业进行了跟踪检查 。结果  检查共发现421条缺陷，包括主要缺陷38条，一般缺陷383条。结论  国内疫苗生产企业基本按照GMP要求执行，管理尚存在不足，企业还应不断提升质量管理能力，确保疫苗质量。

 目的   比较西林瓶和预灌封注射器包装灭菌注射用水的稳定性和相容性。方法 采用2种包装形式各连续生产3批灭菌注射用水，根据《国家药包材标准》和中国药典2015年版二部的相关要求，同时对西林瓶和预灌封装灭菌注射用水进行稳定性和相容性的加速试验研究。 结果   2种包装形式各3个批次的灭菌注射用水，所有项目的检测均符合相关要求。西林瓶（pH值：6.1~6.7，电导率：4~7 μS/cm）和预灌封注射器装灭菌注射用水（pH值：6.1~6.7，电导率：1~5 μS/cm）同期结果差别较小，所测物质的迁移水平均在安全范围内，玻璃制品无显著脱片现象。 结论   预灌封注射器对灭菌注射用水稳定性和相容性的影响与西林瓶包装相似，可作为灭菌注射用水的包装材料。

 目的  了解安徽省≤6岁健康儿童抗百日咳毒素（pertussis toxin，PT）抗体水平，为评价疫苗接种效果提供依据。 方法   采用多阶段随机抽样方法，在全省16个市0～6岁7个年龄组人群中抽取健康儿童1 787人，用ELISA定量检测血清抗PT IgG抗体。各组之间抗体阳性率差异比较采用χ²检验，抗体几何平均浓度（GMC）差异比较采用F检验。结果   2011年安徽省0～6岁儿童中，几乎所有采集的血清均呈现不同的抗体水平，以0岁组最高（10.33 IU/ml）。抗体GMC随免疫后时间的延长有下降的趋势。不同年龄组之间抗体阳性率和GMC差异均有统计学意义（χ²=15.06，P＜0.05；F=7.96，P＜0.01）。不同性别之间抗体阳性率和GMC差异均无统计学意义（χ²=0.98，P＞0.05；Z=0.852，P=0.394）。 结论   安徽省0～6岁儿童抗PT IgG抗体水平随年龄的增加而降低，是否需要加强免疫需作进一步研究。

目的  通过应用低浓度对照品，对定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法（O-乙酰基测定法）进行改良，并验证该法的可行性。方法  以含0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μmol溴化乙酰胆碱的对照品溶液制作改良O-乙酰基测定法的标准曲线，并对该法的标准曲线线性、准确度、精密度、专属性和耐用性进行验证。结果  改良O-乙酰基测定法的标准曲线线性良好，决定系数>0.998。该法的准确度、精密度和专属性良好，O-乙酰基回收率为99.8%～101.3%，实验间和实验内相对标准偏差均<4%，O-乙酰基加样回收率均>96%。该法测定O-乙酰基的定量限为0.070 mmol/L。结论  应用低浓度对照品的改良O-乙酰基测定法可用于定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量。