自首次报道以来，新型冠状病毒（2019 novel coronavirus，2019-nCoV）引起的新型冠状病毒肺炎已迅速在全球传播。2019-nCoV感染可引起严重肺炎，危及患者生命，目前尚无特效药物。2019-nCoV刺突蛋白及其受体血管紧张素转化酶2的结构已获得解析，为药物的开发提供了基础。通过人外周血单B细胞抗体筛选技术及其他抗体筛选技术，已获得多种针对2019-nCoV的中和抗体。抗体药物的开发为新型冠状病毒肺炎的预防和治疗提供了新的选择。此文简要综述抗2019-nCoV抗体类药物的研究开发。

目的  对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒（2019 novel coronavirus，2019-nCoV）核酸检测方法进行系统性验证。方法  根据血浆样本实际情况，并结合试剂盒要求，建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时荧光定量PCR检测方法，并从专属性、检测限（limit of detection，LOD）、重复性及中间精密度对该方法进行系统性的验证，对20份COVID-19康复者恢复期血浆样本进行性能确认。结果  专属性：阳性样本及阴性样本均能有效被检出；检测限：1×LOD~2×LOD企业参考品19次检测开放阅读框1a/b和核衣壳蛋白基因基因均为阳性；重复性和中间精密度：两种阳性对照基因以及内部质控在不同荧光通道的循环阈值的相对标准偏差均符合要求。性能确认：康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测结果均为阴性。结论   该检测方法专属性强、稳定可靠、重复性好，适用于COVID-19康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测。

目的  通过比较提取效率选择新型冠状病毒核酸提取试剂盒，并考察方法对血浆的核酸检测适用性。方法 采用3种不同厂家核酸提取试剂盒对血浆中新型冠状病毒核酸进行提取，使用1种核酸检测试剂盒进行扩增和核酸检测。结果    核衣壳蛋白（nucleocapcid，N）基因片段和开放阅读框1ab（open reading frame 1a/b，ORF1ab）基因片段标准曲线的线性相关系数均≥0.999。核酸提取试剂盒A对ORF1ab基因的回收率为91%，对N基因的回收率为38%，试剂盒B对ORF1ab基因的回收率为104%，对N基因的回收率为44%，试剂盒C对ORF1ab基因的回收率为0%，对N基因的回收率为12%.采用试剂盒A、B均能达到100%正确率，试剂盒C仅能达到62.5%正确率，误检均为假阴性。结论   采用提取试剂盒A、B和新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒进行核酸检测，均能满足新型冠状病毒肺炎康复者恢复期血浆中病毒核酸的检测需求。

目的  建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒（2019 novel coronavirus，2019-nCoV）灭活血浆的工艺及其质量标准。方法  采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆，开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查，进行亚甲蓝光照灭活，并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等，判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果   亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化，血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml，抗体滴度未出现明显下降，各项检测结果均符合质量要求。结论  确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。

 

病毒性感染是引起人体众多疾病的主要原因之一，病毒分布广泛，危害性普遍较高。维生素D作为人体的必需物质，是机体免疫调节的重要参与者，在预防和治疗病毒性感染方面一直发挥着重要作用。此文主要论述了维生素D防治几种常见病毒性感染的最新临床研究进展,并对其防治COVID-19的前景进行了展望。

目的  构建人IL-2与HBsAg融合基因并转化到BCG中构建重组BCG（recombinant BCG，rBCG），为制备治疗和预防乙型肝炎和结核病的二联疫苗奠定基础。方法  以IL-2 pMalLP质粒和HBsAg pMalLP质粒为模板，设计引物，利用PCR技术扩增HBsAg和IL-2基因，进行重叠PCR获得融合基因IL-2-HBsAg并纯化，将融合基因克隆至穿梭表达载体pMV261上得到重组质粒，然后电转化导入BCG感受态细胞，以蛋白质印迹法检测融合基因在rBCG中的表达。结果  通过重叠PCR的方法成功获得IL-2-HBsAg融合基因，将融合基因成功插入穿梭表达载体，rBCG能分泌表达融合蛋白。结论 构建人IL-2与 HBsAg融合基因重组质粒并导入BCG，获得了稳定表达融合蛋白的rBCG。

目的   荟萃分析卡介菌多糖核酸治疗口腔扁平苔藓的有效性和安全性。方法   检索美国医学文献数据库、Embase、Cochrane图书馆、万方数据库、维普数据库、中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、中国临床试验注册中心、美国临床试验注册中心，搜集卡介菌多糖核酸与非卡介菌多糖核酸比较治疗口腔扁平苔藓的临床随机对照试验。筛选文献和提取有效数据后，根据Jadad质量评分法对纳入荟萃分析的文献进行评分。采用STATA 15.0统计软件进行荟萃分析、敏感性分析和发表偏倚分析。结果   6篇文献符合纳入标准，共计484例患者。荟萃分析结果显示卡介菌多糖核酸治疗组（试验组）总有效性优于非卡介菌多糖核酸治疗组（对照组）（优势比＝2.29，95％置信区间：1.57~3.35，P<0.05），复发率低于对照组（相对危险度＝0.50，95％置信区间：0.32~0.79，P<0.05），差异具有统计学意义。两组均无严重不良反应发生，且发生不良反应例数无统计学差异（相对危险度＝0.57，95％置信区间：0.19~1.71，P＞0.05）。Begg’s 检验结果显示未存在明显发表偏倚。结论  卡介菌多糖核酸治疗口腔扁平苔藓的临床效果优于对照组，且尚无严重不良反应发生，临床上值得推广应用。

目的  为抗体偶联药物(antibody-drug conjugate, ADC)研发提供参考。方法   依托科睿唯安Cortellis数据库，通过检索全球ADC的上市情况、研发地域分布、药物适应症分布及临床试验部分管线等数据，分析目前ADC的整体研发态势和全球布局。结果   截至2020年11月20日，全球处于活跃状态的ADC共414个，其中已上市10个；美国ADC研发数量居全球首位，中国位居第二；ADC主要用于乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、肺癌、胃癌等癌症治疗；国际在研管线中，靶点分布较为多样化，国内在研管线则相对集中，主要聚焦于人类表皮生长因子2。结论   对ADC的研发态势和全球布局进行了全面分析，为我国ADC的研发提供了参考。

目的   验证纳米膜过滤法和低pH孵放法去除/灭活静注人免疫球蛋白中病毒的效果。方法   纳米膜过滤法选用猪细小病毒为指示病毒，低pH孵放法选用水疱性口炎病毒、辛德比斯病毒、HIV和伪狂犬病毒为指示病毒，高浓度静注人免疫球蛋白在pH4.6～5.0、30～32 ℃条件下作用不同时间后，取样检测样品中残余病毒滴度以评价灭活病毒效果。结果   纳米膜过滤可降低猪细小病毒滴度达4.50～4.68 lg，低pH孵放法对伪狂犬病毒、辛德比斯病毒、水疱性口炎病毒、HIV等指示病毒的滴度降低量均大于4 lg。结论   纳米膜过滤法和低pH孵放法均能有效去除/灭活指示病毒，提高静注人免疫球蛋白产品的安全性。

目的  初步筛选去除血浆组分II溶解液中IgA效果最佳的pH条件和滤膜载量。方法  以不同pH组分Ⅱ溶解液进行过滤，比较浊度、IgA含量、分子大小分布、纯度。结果 pH7.25~7.90，滤膜载量300~400 L/m2，组分Ⅱ溶解液经滤膜组合过滤后滤液浊度下降45.8%~60.5%、IgA含量下降68.0%~80.0%、分子大小分布为100%、纯度为100%。结论  组分Ⅱ溶解液在pH7.25~7.90，载量≤400 L/m²条件下，经滤膜过滤后不仅能有效去除IgA，而且其他质量指标保持不变，可为规模化生产工艺改进提供参考。

目的  研究磺基水杨酸处理样品对高效液相色谱法检测人纤维蛋白原中蔗糖含量的影响。 方法  通过比较未经和经磺基水杨酸处理的蔗糖对照品溶液色谱图，确认磺基水杨酸处理对蔗糖水解的影响。蔗糖对照品溶液和含蔗糖人纤维蛋白原制品分别经磺基水杨酸处理2、3、4、5 h，研究处理时间对蔗糖水解的影响。用未经和经磺基水杨酸处理的蔗糖对照品溶液分别建立标准曲线，计算3批人纤维蛋白原中蔗糖含量，并与理论添加量比较，评价磺基水杨酸处理对人纤维蛋白原中蔗糖含量检测的影响。 结果    经磺基水杨酸处理的蔗糖对照品溶液色谱图比未经磺基水杨酸处理的增加2个水解峰，其中1个为葡萄糖峰；蔗糖对照品溶液和人纤维蛋白原制品经磺基水杨酸处理2、3、4、5 h，水解峰面积逐步增加；用未经和经磺基水杨酸处理的蔗糖对照品溶液分别建立的标准曲线计算3批人纤维蛋白原中蔗糖含量，计算结果与理论添加量的比例分别为93.1%±1.7%和97.7%±1.8%，F值为10.78，P值为0.03，差异有统计学意义。 结论   蔗糖经磺基水杨酸处理会发生水解，且处理时间延长，水解程度增加。蔗糖对照品溶液经磺基水杨酸处理后建立的标准曲线更适合人纤维蛋白原中蔗糖含量检测。

目的  建立测定猪凝血酶中右旋糖酐20含量的高效液相色谱法，并对方法进行验证和初步应用。方法   根据分子排阻色谱法，以亲水硅胶高效体积排阻色谱柱进行分离，采用示差折光检测器测定右旋糖酐20含量。应用该方法对3批猪凝血酶样品中右旋糖酐20含量进行检测。 结果   该方法专属性强，线性范围为2.314~7.406 mg/ml；低、中、高3个浓度水平的平均回收率分别为99.72%、100.60%、101.83%，总平均回收率为100.72%(n=9)，相对标准偏差为1.10%（n=9）；中间精密度相对标准偏差为1.43%（n=12）。3批猪凝血酶样品中右旋糖酐20含量分别为18.051、18.731、18.161 mg/ml，均符合企业标准。 结论  该方法专属性强，准确度、精密度、耐用性良好，适用于猪凝血酶中右旋糖酐20含量测定。

至2021年2月，新型冠状病毒引起的新型冠状病毒肺炎疫情全球大流行已造成1亿以上的报告病例和超过200万的致死病例。随着临床治疗、病理学、流行病学和病毒分子生物学研究取得进展，疫苗研发也获得了重大突破。目前已有多款疫苗完成初步的临床安全性和效力评估，并获得紧急使用或有条件上市批准。此文对研究进展较快的多种类型新型冠状病毒肺炎疫苗的临床研究结果进行分析，总结疫苗安全性、免疫原性和初步保护效力的临床研究结果，对疫苗面临的挑战和应对策略进行讨论和展望，重点描述和总结新型技术平台的mRNA疫苗及灭活疫苗的技术指标和特点。

目的  建立Sabin株毒种制备脊髓灰质炎灭活疫苗（inactivated poliovirus vaccine, IPV）生产工艺并评价其免疫原性。方法  采用Vero细胞培养Sabin株脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒，制备3价Sabin株IPV（Sabin strain IPV, sIPV）。通过ELISA检测D抗原含量。检测病毒滴度，电子显微镜下观察纯化病毒形态并电泳鉴定，分析抗原纯度，同时检测纯化原液宿主细胞残余DNA和蛋白含量。通过大鼠体内接种法比较sIPV和野生株IPV免疫原性，并观察中和抗体滴度变化。结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型收获液D抗原含量分别为2 437、365、1 253 DU/ml，病毒滴度分别为每毫升8.4 、7.8和7.9 lg半数细胞培养物感染量。纯化病毒抗原纯度均﹥99%。电子显微镜下观察可见直径20~30 nm病毒颗粒，电泳鉴定正确。纯化原液的残余宿主细胞DNA和蛋白含量分别12.3 pg/500 μl和9.8 ng/ml。sIPV 3针免疫后在大鼠体内诱导产生抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体的几何平均滴度分别为9 397.8、554.7和4 668.4，与野生株IPV相比Ⅰ型明显增高（t=-3.429,P=0.004），Ⅱ、Ⅲ型无明显差别，初免后19周内均维持在较高水平。结论 建立了稳定的sIPV生产工艺，制备的sIPV免疫原性较好。

目的  建立准确快速检测灭活疫苗中β-丙内酯（β-propiolactone , BPL）含量的分析方法。方法  采用气相色谱法进行BPL含量检测，用外标法计算BPL含量。对分析方法的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性进行验证。结果  BPL溶液和供试品溶液在相应保留时间内可见BPL峰，阴性对照溶液未出峰。BPL峰5次进样峰面积相对标准偏差小于2%且与其他峰分离度大于1.5。BPL的浓度在1.11~35.52 μg/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度分别为2.22、4.44和8.88 μg/ml的供试品溶液回收率在97.3%~106.9%之间，相对标准偏差均小于3%。检测限为0.30 μg/ml，定量限为0.49 μg/ml。结论  建立的BPL检测方法具有良好的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、耐用性，符合定量检测的需求。

目的  建立麻疹减毒活疫苗细胞工厂多次收获工艺。方法  采用细胞工厂培养2BS细胞，以不同感染复数接种麻疹病毒，绘制病毒生长曲线以确定适宜感染复数。在感染后不同时间点，微量滴定法比较仅收获胞外病毒与收获胞内外病毒的滴度。比较单次收获与多次收获病毒的滴度，并对原液和冻干成品进行稳定性试验。结果  确定细胞工厂培养麻疹病毒的适宜感染复数为0.010～0.100。感染后108～168 h细胞外病毒滴度与含胞内病毒滴度无明显差异（t=0.524,p＞0.05）。多次收获得到的病毒总量高于单次收获。单次收获与多次收获得到的病毒原液-65 ℃保存3个月，病毒滴度下降均不超过每毫升0.3 lg半数细胞培养物感染量，冻干成品37 ℃保存1周，滴度下降均不超过每毫升0.5 lg半数细胞培养物感染量。结论  建立了细胞工厂培养麻疹减毒活疫苗的多次收获工艺。

 目的  制备麻疹病毒抗血清，用于含麻疹病毒成分的联合减毒活疫苗的检定。方法  制备麻疹病毒Edm-3株病毒收获液，采用弗氏佐剂，对家兔和豚鼠分别经皮下多点或腹腔途径免疫3针，加入制备抗血清，经除菌过滤和补体灭活后，对抗血清进行中和效价、中和能力、细胞毒性及特异性检测。结果 用4种免疫方式制备的抗血清中和效价均高于1∶320，其中豚鼠背部皮下组中和效价为最高，达到1∶2 459；将豚鼠背部皮下组抗血清稀释至1∶320，能够完全中和每毫升2 000 半数细胞培养物感染量的麻疹病毒，同时对Vero细胞、RK-13细胞、MRC-5细胞无细胞毒性，且不可中和腮腺炎病毒、风疹病毒和水痘病毒。结论采用Edm-3株麻疹病毒收获液，通过背部皮下多点方式免疫豚鼠可制备具有较高中和效价的麻疹抗血清，可用于疫苗检定。

目的  比较乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴度单瓶平行检测与多瓶混样检测之间的差异性，为进一步完善中国药典中相关技术要求奠定基础。方法  1人份和5人份乙型脑炎减毒活疫苗各抽取20批，同一批次疫苗样品随机取样6瓶，3瓶用于病毒基础滴度检测，3瓶用于病毒热稳定性滴度检测。检测方式分别为3瓶单瓶平行检测与3瓶混样检测：单瓶平行检测是从3个单瓶中取样分别检测，所得结果取几何均值；混样检测是从相同的3瓶疫苗中分别取样至适宜的容器中进行混合，再取样进行病毒滴度检测。对采用单瓶平行检测的几何平均滴度值和混样检测滴度值进行配对t检验，判断两者之间的差异是否存在统计学意义。结果  两种滴度检测方式得到的疫苗基础滴度值间的t值为0.72，P值为0.48；热稳定性滴度值间的t值为0.34，P值为0.73。两种检测方式的结果差异无统计学意义。结论  单瓶平行检测与多瓶混样检测方式的差异无统计学意义，均可用于乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴度的检测。

目的 探讨采用复苏等量分装的标准贮备菌株培养18~24 h后配制的菌悬液作为生物制品微生物验证用菌液的可行性。方法 制备等量分装的标准贮备菌株，选择保藏0、3、6、9、12、13个月对其复苏后菌液进行菌落计数，对计数结果进行单因素方差分析。结果 分析显示，储存3、6、9、12、13个月的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌计数与0个月比较无显著差异，F值分别为2.24、2.21、0.58、1.59，P值均大于0.05，计数结果稳定。结论 采用等量分装的标准贮备菌株复苏后配制菌悬液，可作为生物制品微生物验证用菌液，菌液浓度稳定。

目的 建立和验证有效分离5型肺炎球菌结合物原液（结合物原液）中游离多糖的方法，以供测定游离多糖含量。方法 通过游离多糖添加回收率试验以及氯化钠浓度对咔唑-硫酸法吸光度值影响试验，选择结合物原液中游离多糖和多糖-蛋白结合物分离时最佳的氯化钠浓度；通过蛋白回收率试验筛选出该条件下所能沉降蛋白质的浓度范围；比较标准曲线经脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate，NaDC）/HCl法处理前后吸光度值的变化，验证NaDC/HCl法对多糖含量检测的影响；对所建立方法的专属性、精密度及准确度进行验证。结果 NaDC/HCl法处理结合物原液时的最佳氯化钠浓度为0.15 mol/L；结合物原液中蛋白浓度在100 μg/ml以内，NaDC/HCl法能实现蛋白质的完全沉淀；NaDC对多糖含量检测无干扰；该方法专一沉淀蛋白质，而对游离多糖无影响；准确度验证试验的回收率在93.17%~102.59%之间；日间以及日内的精密度变异系数均小于10％。结论 NaDC/HCl法能充分分离结合物原液中的多糖-蛋白结合物和游离多糖，具有良好的准确度和重复性，适用于5型肺炎球菌结合物原液中游离多糖含量的测定。

疫苗接种是预防传染病常用的主要手段。目前常用的减毒活疫苗具有感染的可能性，故鉴别野生株和疫苗株病毒是确定病原体和进行诊断的基础。传统的鉴别方法有基因测序、PCR-限制性片段长度多态性分析等，这些鉴别方法常用且准确性较高，但存在耗时长、要求高等缺陷。实时定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）技术是通过PCR反应体系中荧光物质与核酸片段的作用来反映扩增过程。qPCR技术除了能准确地检测、鉴别野生株和疫苗株外，还具有特异性强、灵敏度高、耗时短等优点，可以为快速鉴别和临床诊断提供帮助。

 在疫苗制剂中添加免疫刺激剂可以促使其诱导高质量且持久的免疫应答。为了改善铝佐剂在
细胞免疫水平中的不足，Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）激动剂被开发，其中TLR4激动剂在疫苗中应用尤其广泛。单磷酸脂质A（monophosphoryl lipid A, MPL）是典型的TLR4激动剂，为了开发低毒性的脂质A佐剂以增强免疫刺激效果，人们开发合成了多种MPL类似物。此文综述了MPL及其类似物在疫苗制剂中的应用现状和研究进展，旨在为MPL及其类似物的深入研究提供理论基础。

流感疫苗是目前应对流感最有效的措施，传统疫苗包括全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和减毒活疫苗，近年来逐渐成为研发趋势的有重组亚单位疫苗、核酸疫苗、活病毒载体疫苗等。病毒样颗粒(virus-like particle，VLP)疫苗作为特殊形式的亚单位疫苗，具有生产迅速、安全性高、免疫原性较高等优势。VLP可以高效地诱发体液免疫与细胞免疫，且可经多种途径接种。目前已有多种表达系统用于制备VLP，其中应用最为广泛的是杆状病毒表达系统。此文综述了流感病毒VLP的类型、组装、抗原选择、免疫途径以及流感病毒VLP疫苗在杆状病毒表达系统中的研究进展。

随着新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫苗研发的快速推进，数十种疫苗进入临床研究阶段，数种不同类型COVID-19疫苗在不同国家和地区获批使用。疫苗的安全性始终是专家和公众都密切关注的重点之一。此文系统总结并分析了目前已公开发表或官方发布的COVID-19疫苗上市前后安全性数据，为全面理解疫苗安全性，增强公众对疫苗的信心，同时更好地开展疫苗大规模应用后安全性监测和信号挖掘提供科学参考。

目的  在毕赤酵母细胞中稳定表达经连接肽连接的HBsAg和水痘-带状疱疹病毒糖蛋白（glycoprotein，g）E的重组蛋白，并进行初步纯化及颗粒性验证。方法  构建HBsAg-gE的四拷贝重组表达质粒，经酶切线性化后电转化至毕赤酵母KM71细胞中，甲醇诱导表达。采用免疫印迹法和ELISA检测表达的重组蛋白，经蔗糖密度梯度离心和凝胶排阻层析初步纯化后进行透射电子显微镜观察。结果  HBsAg-gE四拷贝重组质粒经双酶切鉴定正确。表达的重组蛋白经免疫印迹法检测，可以与小鼠抗gE单克隆抗体及抗HBsAg多克隆抗体特异性结合，相对分子质量约90 000。经ELISA检测HBsAg呈阳性。蔗糖密度梯度离心后，重组蛋白聚集在40%至55%区带之间，在透射电子显微镜下观察到直径约20 nm左右的病毒样颗粒结构。结论  成功在毕赤酵母中表达了HBsAg-gE病毒样颗粒，为在酵母系统中表达水痘-带状疱疹重组疫苗奠定了基础。

目的  建立人3型副流感病毒（human parainfluenza virus type 3，HPIV3）感染小鼠模型，并研究其免疫应答特点。方法 用HPIV3兰州分离株HPIV3LZ1728C19毒株鼻腔接种BALB/c小鼠，每天检测体温和体质量。用ELISA检测血清HPIV3特异性IgG、IgA滴度，实时定量PCR检测鼻腔灌洗液和肺组织病毒滴度，流式细胞术检测外周血、肺、脾淋巴细胞中的HPIV3特异性IFN-γ CD4⁺和IFN-γ CD8⁺ T细胞，酶联免疫斑点法检测淋巴细胞中分泌HPIV3特异性IgG/IgA的B细胞，肺组织切片观察病理变化。结果 感染后第3天，小鼠鼻腔和肺的病毒负载量分别到达峰值10⁴拷贝/ml鼻洗液和10⁷拷贝/g组织，肺部发生炎症性病理变化。感染组早期体质量增加显著滞后于对照组（感染后第3天：t=4.64，P<0.05）。感染组血清中HPIV3特异性IgG（t=2.94，P<0.05）和IgA水平（t=18.66，P<0.05）显著增高，外周血、肺、脾均出现HPIV3特异性抗体分泌淋巴细胞。病毒感染诱导小鼠肺产生记忆性IFN-γ CD8⁺ T和IFN-γ CD4⁺ T细胞应答，脾和外周血产生IFN-γ CD4⁺ T细胞应答。结论 成功建立了HPIV3感染小鼠动物模型，感染小鼠产生了显著的肺黏膜体液和细胞免疫应答。

目的  研究两种狂犬病疫苗免疫程序对抗体效价的影响。方法  将献血浆者按照基础免疫剂量分成两组，第1组初次免疫2剂，第2次、第3次各免疫1剂；第2组初次、第2次、第3次均免疫1剂；两组间隔时间一致。在初次免疫后第14、28、42、56、70、84天，检测献血浆者血浆中的狂犬病抗体效价，考察是否符合单人份生产用原料血浆抗体效价标准（≥8 IU/ml）。结果  初次免疫后第14、28、42天，第1组献血浆者抗体阳转率更高，差异具有统计学意义（c²值分别为4.65、8.69、4.11，P＜0.05）；仅在初次免疫后14 d内，第1组抗体效价≥8 IU/ml的比例更高，差异具有统计学意义（c²=5.45，P＜0.05）；距初次免疫第56、70、84天两组血浆抗体效价差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结论  在免疫程序期间，大剂量的狂犬病疫苗免疫程序能取得较好的免疫应答效果，但在长期抗体水平方面与小剂量注射程序无明显差异。

 目的  建立检测聚乙二醇化胰高血糖素样肽1类似物（polyethylene glycolylated  glucagon like peptide -1 analogue，PEG-GLP-1a）生物活性的报告基因法，并对该方法进行验证。 方法 将人胰高血糖素样肽1受体表达载体和分泌型碱性磷酸酶（secreted alkaline phosphatase, SEAP）报告基因载体瞬时共转染HEK293T细胞，培养后加入PEG-GLP-1a刺激细胞分泌SEAP，使用SEAP报告基因检测试剂盒进行测定，并验证其专属性、准确性、精密度、稳定性等指标。 结果  人胰高血糖素样肽1受体和SEAP双载体瞬时共转染的HEK293T细胞对PEG-GLP-1a具有强反应性。使用该方法测定PEG-GLP-1a具有良好的专属性。加标回收率为97.6%~102.23%，准确性较好。不同测定日期的日内半数效应浓度的变异系数都小于10.22%，不同测定日期的日间半数效应浓度的变异系数都小于13.02%。 结论  报告基因法可以用于PEG-GLP-1a的生物活性检测。

目的 筛选阳性对照病毒在不同细胞基质中的最适感染复数（multiplicity of infection，MOI）,以优化水痘减毒活疫苗外源病毒因子检查法（细胞培养法）。方法 致细胞病变观察：将水痘-带状疱疹病毒以0.005、0.010、0.020的MOI分别接种至Vero、2BS和MRC-5细胞，培养7 d后观察细胞病变，病变较典型时对应的MOI即为最适MOI。血细胞吸附观察：将牛副流感病毒3型以0.1、0.2、0.4的MOI分别接种至Vero、2BS、MRC-5细胞，培养7 d后分别于2~8 ℃和20~25 ℃放置30 min，观察血细胞吸附，血细胞吸附较典型时对应的MOI即为最适MOI。结果 对Vero、2BS、MRC-5细胞，当水痘-带状疱疹病毒MOI分别为0.020、0.010、0.005时，30%~50%细胞出现典型病变；对Vero、2BS、MRC-5细胞，当牛副流感病毒3型MOI分别为0.1、0.2、0.4时，30%~50%细胞出现典型血细胞吸附。结论 水痘-带状疱疹病毒感染Vero、2BS和MRC-5细胞的最适MOI分别为0.020、0.010、0.005；牛副流感病毒3型感染Vero、2BS和MRC-5细胞的最适MOI分别为0.1、0.2、0.4。

目的  考察不同胰蛋白酶及消化后是否弃去胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾（Madin-Darby canine kidney，MDCK）细胞消化效果的影响，并评价培养基中添加胎牛血清对减轻胰蛋白酶细胞毒性的作用。方法  选用5种胰蛋白酶分别消化MDCK细胞，消化5 min后弃去胰蛋白酶为弃去组，不弃去为保留组。观察消化过程，记录细胞达到不同状态所需的时间。完全消化后，检测细胞的活率、结团率、直径。以不同浓度的胰蛋白酶消化MDCK细胞，按培养基是否添加胎牛血清分为含血清和无血清组，检测细胞活性。 结果  重组胰蛋白酶消化时间长于动物源胰蛋白酶。保留和弃去组细胞活率均值都大于94.77%，结团率均值均大于34.56%，直径均值分别为17.33和16.97 μm且差异有统计学意义（t=4.632, P<0.001）。细胞活性随胰蛋白酶添加量呈现梯度变化。含血清和无血清组的细胞活性差异有统计学意义（t=12.545, P<0.001）。 结论  5种胰蛋白酶均可完全解离贴壁MDCK细胞，其中重组胰蛋白酶消化时间较长，作用温和，比较适合生产。弃去胰蛋白酶再继续消化的做法可行且有益，胰蛋白酶浓度对细胞活性有影响，胎牛血清可以减轻胰蛋白酶的潜在毒性。 

 目的  确认洁净区使用消毒剂的消毒方式，保证对洁净区的有效消毒。方法  选取新洁尔灭和过氧乙酸对洁净区进行消毒，取样检测微生物限度并检测消毒剂残留，考察消毒面积、接触的不同材质、消毒剂作用时间对消毒效果的影响。结果  采用任一种消毒剂，每4平方米更换1次完全浸湿消毒剂的无尘抹布，消毒剂与待消毒界面接触5 min后，微生物消杀效果最佳；使用清洁剂进行二次擦拭后，消毒剂残留量不影响人员健康及产品质量。结论  确定了适用于洁净区有效消毒的消毒方式。

宿主细胞残留DNA是指可能出现于生物制品中的来自宿主细胞的DNA片段。用传代细胞株生产的生物制品，其宿主细胞残留DNA可能会传递肿瘤或病毒相关基因，存在潜在的危险性。各国药品监督管理机构对宿主细胞残留DNA的残留量有着严格的限度控制，同时各国药典也提供数种经典的检测方法。建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法有助于监测生产工艺，确保生物制品的安全性和质量。此文对宿主细胞残留DNA潜在的危害、国内外监管机构对宿主细胞残留DNA检测标准和检测方法以及各方法的特点及研究进展做一综述。

流感病毒表面含有丰富的神经氨酸酶(neuraminidase，NA)，其以多种方式参与病毒复制，并促进病毒颗粒从受感染的细胞中释放和传播。NA与流感疫苗的免疫效果有关，NA抑制（NA inhibition，NI）抗体在免疫应答中也起到重要的作用。由于目前生产工艺、疫苗类型等原因，疫苗中的NA含量/活性存在差异，如何准确检测疫苗中的NA含量/活性是现在亟待解决的问题。相关检测方法的开发更加有利于全面分析流感疫苗的有效成分，为评估流感疫苗保护效果提供更多的手段。此文就最新的流感病毒NA含量/活性和NI抗体的检测方法进行综述。

目的  探讨COVID-19康复者恢复期血浆及COVID-19静注人免疫球蛋白（human intravenous immunoglobulin，IVIG）（COVID-19-IVIG）IgG及亚类的水平。方法  选择2020年2月至3月国药集团武汉血液制品有限公司采集的COVID-19康复者恢复期血浆及制备的COVID-19-IVIG作为研究组，选择健康者单采血浆及IVIG作为对照组。采用免疫比浊法检测并比较免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM）及IgG亚类水平。分析COVID-19-IVIG中IgG亚类与其他蛋白之间的相关性。结果  健康者单采血浆的IgG3、IgG4水平显著高于康复者恢复期血浆（P<0.05），但IgG1、IgG2水平差异无统计学意义（P>0.05）。恢复期血浆IgM水平与血型﹝相关系数（r）=0.649﹞、抗体效价（r=0.696）呈正相关性（P<0.05），IgG1（r=0.745）、IgG2（r=0.952）水平与IgG呈正相关（P<0.05）。COVID-19-IVIG的IgG1/显著高于康复者恢复期血浆（t=3.633，P<0.05），而IgG4/显著低于康复者混合血浆（t=-4.899，P<0.05），两组间IgG2/ 和IgG3/ 差异无统计学意义（t值分别为-0.974和-0.280，P值均大于0.05）。COVID-19-IVIG与IVIG的IgG亚类分布差异无统计学意义（P>0.05）。在COVID-19-IVIG中，仅IgG2水平与α2-巨球蛋白呈负相关（P<0.05）。结论  恢复期血浆IgG亚类水平与健康者单采血浆有一定差异。COVID-19-IVIG制备过程中存在IgG亚类水平的变化，COVID-19-IVIG IgG亚类齐全，与IVIG IgG亚类水平相近。COVID-19-IVIG对治疗COVID-19患者具有积极意义。

目的 研究兔抗肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）血清制备中不同免疫剂量对抗体效价的影响。方法 将9只实验兔简单随机分为3组，每组3只。5、50和100 μg 3个剂量EV71灭活疫苗和弗氏佐剂均匀混合后，通过肌内注射途径分别免疫3组动物，于第0、7、14及28天各免疫1次，每7天采血，分离血清，检测抗EV71中和抗体效价。结果 100 μg剂量组兔血清抗体效价显著高于5和50 μg剂量组（第42天t值分别为–3.282和–2.486，P值均<0.05）。第42天时，兔血清抗体效价和免疫剂量（5~100 μg范围内）呈线性关系，回归方程y=478.229x–2 041.820。结论 在本实验选择的3个免疫剂量中，随着免疫剂量升高，产生的血清抗体效价也升高，且呈线性关系。

目的  探索磁力搅拌器的搅拌频率对水痘减毒活疫苗（水痘疫苗）半成品滴度的影响。方法  设置3种不同的搅拌方案配制一定体积的水痘半成品，通过对比水痘疫苗半成品滴度，选取较好的搅拌方案。根据筛选出的搅拌方案进行优化，确定最佳搅拌频率。结果  液体质量分别为10、37、/6/91 kg时，搅拌电机输出频率分别为10、22、34、46 Hz对水痘疫苗半成品滴度影响最小。结论  确认了磁力搅拌器的最佳搅拌频率，为提高水痘疫苗质量奠定基础。

目的  探讨黄热病毒17D减毒株在人二倍体细胞(2BS株)上的传代适应性。 方法  通过噬斑检测法检测病毒滴度，观察在不同培养条件下和连续传代时17D减毒株在2BS细胞上的增殖情况。结果  黄热病毒17D减毒株在2BS细胞上连续传5代可适应在2BS细胞上的生长，并以感染复数 0.005~0.010 接种、培养温度在 35~37 ℃、pH在7.4时，出现最高病毒滴度。 结论  初步确定了在人二倍体细胞（2BS株）上培养17D减毒株的适宜条件，为进一步研发使用人二倍体细胞制备黄热病疫苗奠定了基础。  

目的  评价兰州生物制品研究所有限责任公司（兰州公司）口服轮状病毒活疫苗的稳定性。方法  选取兰州公司2014年生产的3批口服轮状病毒活疫苗，置于37 ℃条件下进行热稳定性试验，在0和7d取样进行病毒滴度检查；置于25 ℃条件下进行加速稳定性试验，在0、1、2、3个月进行全部检定项目检查；置于2～8 ℃条件下进行长期稳定性试验，在0、3、6、9、12、15、18个月进行全部检定项目检查。结果  口服轮状病毒活疫苗于37 ℃条件保存7d，热稳定性试验符合质量标准（病毒滴度≥每毫升5.5 lg半数细胞培养物感染量，病毒滴度下降≤1.0 lg）。在25 ℃条件下保存3个月，全部检定项目均符合质量标准。在2～8 ℃条件下保存18个月，全部检定项目均符合质量标准。结论  兰州公司生产的口服轮状病毒活疫苗质量稳定。