目的  研究采用过氧化氢法和高压均质法降解对6A型肺炎球菌多糖（type 6A pneumococcal polysaccharide，PnPS6A）结构和抗原性的影响。方法  分别采用过氧化氢法〔将过氧化氢加入多糖（polysaccharide，PS）溶液中，50 ℃反应3 h〕和高压均质法（用高压均质机在5×107 Pa压力下处理PS溶液）降解PnPS6A，降解物经超滤浓缩和冻干后，获得降解的PnPS6A。分别用核磁共振氢谱（nuclear magnetic resonance hydrogen spectrum，¹H-NMR）和双向免疫扩散法检测PnPS6A降解物的结构和抗原性，用抑制ELISA检测降解和未降解的PnPS6A的抗原一致性。结果  2种降解方法均能降低PnPS6A的相对分子质量。2种降解的PnPS6A对PnPS6A抗血清抑制的半数有效浓度与未处理的PnPS6A为同一个数量级，表明降解的PnPS6A的抗原性没有改变。¹H-NMR分析显示，2种降解的PnPS6A的结构与未处理的PnPS6A一致。结论  2种降解方法都能降低PnPS6A的相对分子质量，而且对PnPS6A的结构和抗原性不会产生影响。

目的  建立地高辛标记DNA探针杂交法，检测基于Madin-Darby犬肾（Madin-Darby canine kidney，MDCK）细胞生产的流感疫苗中宿主DNA的残留量。方法  提取MDCK细胞基因组DNA，制备地高辛标记探针。对地高辛标记DNA探针杂交法进行特异性、灵敏度及稳定性验证, 并用此法检测3批MDCK细胞流感疫苗中的DNA残留量。结果 MDCK细胞基因组DNA的质量浓度为33 ng/μl，260 nm与280 nm波长处的吸光度比值为1.9。制备的探针与非同源细胞DNA无杂交，最低检测限度为10 pg。探针在－70 ℃放置9个月后，检测灵敏度仍可达到10 pg。经检测，MDCK细胞流感疫苗成品中的DNA残留量＜10 ng。结论  建立的地高辛标记探针杂交法特异性强、灵敏度高、稳定好，并且操作简便，可用于MDCK细胞流感疫苗中DNA残留量的检测。

目的  探索温度和光照强度对疫苗有效性监测卡（vaccine vial monitor，VVM）的影响，为VVM在疫苗存储、运输和使用环节的应用提供保障。方法  模拟实际运输储存环境，将VVM分别存放在同一温度不同光照强度、同一光照强度不同温度、及室外高温强光照条件下，测定VVM的光密度（optical density，OD）差值，根据其变化确定温度与光照对VVM颜色的影响。结果  VVM贴于疫苗瓶后，环境温度和光照均对其OD值有影响。VVM在高温和强光照环境下存放，OD差值出现明显下降。结论  生产厂家在使用VVM时，除温度外还应考虑光照条件，以确保VVM能真实反映疫苗的储存运输状况。

目的  通过对国内多家疫苗生产企业进行GMP跟踪检查，分析缺陷项，评价国内疫苗生产企业的GMP管理现状。方法  按照国家食品药品监督管理总局（国家总局）药品化妆品监管司的年度检查计划，2016年国家总局食品药品审核查验中心派出检查员对36 家疫苗企业进行了跟踪检查 。结果  检查共发现421条缺陷，包括主要缺陷38条，一般缺陷383条。结论  国内疫苗生产企业基本按照GMP要求执行，管理尚存在不足，企业还应不断提升质量管理能力，确保疫苗质量。

肿瘤疫苗包括肽或蛋白疫苗、肿瘤细胞疫苗、抗独特型疫苗、树突状细胞疫苗、DNA疫苗及病毒载体类疫苗等。重组蛋白疫苗是通过对目的抗原基因的重组、构建、表达得到抗原蛋白，最终制备成的疫苗。随着重组技术及表达纯化技术的日益成熟，重组蛋白疫苗为肿瘤免疫治疗研究提供了一种研发思路。此文针对肿瘤抗原的重组蛋白疫苗做一综述。

麻疹病毒（measles virus，MV）引起的麻疹是一种急性呼吸道传染病。对麻疹疫苗株与原型野毒株Edmonston的全基因组序列分析比较发现，所有疫苗株的磷蛋白、V蛋白、C蛋白、基质蛋白和血凝素中都含有相同的氨基酸突变位点。这些位点可作为未来研究MV减毒分子机制的重要靶点，但目前尚不明确是否与MV的减毒表型相关，需要结合反向遗传学、动物模型等进一步确定。

壳聚糖是一种高分子线性阳离子多糖。由壳聚糖及其化学改性衍生物制备的纳米粒具有生物相容性好、细胞毒性低以及可降解等特点，人们对其作为佐剂或递送系统在疫苗中的应用已开展了广泛研究。此文对壳聚糖及其衍生物纳米粒的制备方法以及在疫苗中的应用进行综述。

免疫佐剂是指与抗原一起或先于抗原注入机体后，可增强机体对该抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。最近发现，某些氨基酸残基数小于50的小分子多肽具有增强机体免疫活性的能力。这些小分子多肽类佐剂因其安全性好、生物相容性好、易合成、纯度高、制备成本低等优点逐渐引起人们的关注。此文综述了小分子多肽类佐剂疫苗的研究现状，并对小分子多肽类佐剂的发展未来作了展望。

IFN-Ⅰ作为一种重要的抗病毒药物在临床上日益受到关注，其抗病毒效应的发挥主要通过IFN-Ⅰ及随后的多种抗病毒分子合成，这两步的实现均需依托相应信号通路的信号转导。近年来，人们对几条 IFN-Ⅰ相关的抗病毒信号通路及其相应的调控机制已有深入了解。此文就IFN-Ⅰ主要抗病毒信号通路及其调控机制的最新进展做一综述。

神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是神经营养因子家族成员之一，参与调节神经细胞的生长、发育、分化、生存和损伤后再修复等过程，对中枢及周围神经元功能性表达也有重要调控作用。现有研究充分表明，NGF与其受体的相互作用在疼痛的发生发展过程中起重要作用，针对NGF的靶向单克隆抗体（单抗）疗法有望成为治疗伤害性疼痛和神经性疼痛的新疗法，目前已有相关单抗进入临床试验阶段。此文就靶向NGF单抗的生物学功能以及相关临床研究进展做一综述。

肿瘤坏死因子α刺激基因6（tumor necrosis factor-α stimulated gene 6，TSG-6）是一种多功能基因，其编码的肿瘤坏死因子α诱导蛋白6（简称TSG-6蛋白）在对急性炎症的抑制以及细胞外基质的重塑中发挥重要作用。近年来，人们对于TSG-6蛋白功能和性质的研究日益关注。此文就TSG-6蛋白的炎症抑制作用做一综述。

2017年11月15－16日在上海召开了国际疫苗发展和生产会议，会上讨论了疫苗行业近期发展趋势和新疫苗研发与技术。

目的  通过定制设计优化白喉类毒素（diphtheria toxoid，DT）层析纯化工艺。方法  将经硫酸铵沉淀的精制DT原液浓缩后分别用Sepharose 4FF （4FF）和Sephacrayl S-300（S-300）凝胶过滤层析进行进一步纯化。根据定制设计，将上样体积、样品浓度、洗脱流速、层析介质设为实验因子，将层析载量、纯度、收率设为响应值，建立数学模型，确定凝胶过滤层析的最优层析参数，并对实验结果进行工艺验证。结果  定制设计的实验结果显示，S-300凝胶过滤层析纯化的DT纯度和收率均高于4FF凝胶过滤层析。进一步分析确定，S-300凝胶过滤层析的最佳参数为：上样体积2.5%，样品浓度45 mg/ml，洗脱流速45 cm/h。当以最佳参数进行S-300凝胶过滤层析纯化时，层析工艺的验证结果符合预期。结论  S-300比4FF更适宜作为DT纯化工艺的凝胶层析介质。

目的  研究大豆蛋白水解物对Madin-Darby犬肾（Madin-Darby canine kidney，MDCK）细胞生长和流感病毒增殖的促进作用。方法  比较MDCK细胞在10%进口胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）-Dulbecco改良Eagle培养基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium，DMEM），10%国产新生牛血清（newborn calf serum，NCS）-DMEM和添加2、4、8 g/L大豆蛋白水解物SHEFF-VAX PLUS PF ACF（PF ACF）的10% 国产NCS -DMEM中的生长情况，以及甲型H7N9流感病毒接种细胞后的血凝素（hemagglutinin，HA）效价。结果  采用培养瓶静置培养时，5种培养体系中的细胞数在第3天达到最高，分别为（8.67±1.54）×106、（4.78±0.64）×106、（10.60±0.23）×106、（9.17±0.51）×106和（4.79±0.19）×106。采用搅拌瓶内微载体培养时，FBS-DMEM、NCS-DMEM和添加2、4 g/L PF ACF的NCS-DMEM中的细胞密度最高可达到（2.56±0.68）×106、（1.74±1.77）×106、（2.20±1.48）×106和（2.50±1.25）×106细胞/ml。流感病毒接种细胞后，FBS-DMEM、NCS-DMEM和添加4 g/L PF ACF的NCS-DMEM中测得的病毒HA效价分别为8.0、3.5和8.0 log2HAU/50 μl。结论  含国产NCS的培养基在添加4 g/L  PF ACF后，MDCK细胞密度和流感病毒产量与含进口FBS的培养基的培养结果相仿，因此，大豆蛋白水解物可作为培养基添加物应用于MDCK细胞培养和流感病毒增殖。

 目的 利用荧光定量PCR法检测重组毕赤酵母外源纤溶酶抑制剂Textilinin-1基因的拷贝数。方法 采用双标准曲线法，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因为内源参照基因，分别利用含有GAPDH和Textilinin-1基因的质粒，进行荧光定量PCR反应，建立标准曲线。对重组毕赤酵母基因组进行荧光定量PCR反应，通过标准曲线计算出外源Textilinin-1基因在毕赤酵母基因组中的拷贝数。结果 GAPDH和Textilinin-1基因的扩增效率分别95.04%和96.36%，两条标准曲线的决定系数均为0.999，且均具有良好的重复性，共检测10个单菌落，均得到Textilinin-1基因拷贝数为2。结论 建立的方法能够鉴定重组毕赤酵母中Textilinin-1基因的拷贝数。

 目的  探索以猪血为原料制备凝血因子ⅩⅢ的新方法。方法  采用硫酸铵分级沉淀法从猪血中粗提凝血因子ⅩⅢ，进一步用二乙氨乙基-Sepharose阴离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶层析进行纯化。结果  获得比活为204.4 IU/mg的高纯度凝血因子ⅩⅢ制剂，其收率为53.5%，纯化倍数21.7倍。结论  从猪血中提取的粗制品再经过离子交换层析和凝胶层析进行分离纯化可得到高纯度凝血因子ⅩⅢ。

水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus，VZV）是引起水痘和带状疱疹的主要病原体，Oka株水痘减毒活疫苗（V-Oka）能有效预防水痘发生。V-Oka株与Oka亲本株之间存在至少42个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点差异，部分位点与V-Oka株的减毒特性有关。目前已知有6个SNP位点为疫苗型位点，可用于区分V-Oka病毒与野生型病毒。近期研究发现某些SNP位点与疫苗相关皮疹有关。此文对水痘减毒活疫苗的重要SNP位点做一综述。

HCV感染是肝细胞癌和其他肝病的主要病因之一。探索用于慢性丙型肝炎高危人群早期诊断的标志物及HCV相关预防和治疗的靶标分子，具有重要的意义。近年来，已发现大量与HCV感染相关的长非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA），它们可能与HCV相关肝细胞癌的发病机制有密切关系。研究这些lncRNAs的结构和作用机制，将促进HCV相关疾病的早期诊断和防治。此文对近年HCV感染过程以及宿主抗病毒应答相关lncRNA的研究进展做一综述。

T细胞受体（T cell receptor，TCR）是T细胞识别抗原和诱导免疫应答的基础。在自身免疫病状态下，T细胞根据疾病特异性抗原可产生相应的特异性TCR库的克隆扩增。通过高通量分子测序技术检测TCR序列，找出疾病状态下和健康人中TCR库的差异，可进一步探索疾病的发病机制，并为进一步通过诱导免疫耐受干预疾病的发生发展提供了可能。此文概述了近5年来TCR测序和自身免疫病之间的原始研究，并对相关研究进展进行了总结。

抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ，AT-Ⅲ）是人血浆中的一种多功能丝氨酸蛋白酶抑制蛋白，也是血液中的重要抗凝血因子，在生理性凝血机制中起重要作用。先天性或获得性AT-Ⅲ缺乏可导致血栓发生。临床上主要应用AT-Ⅲ 浓缩制剂防治血栓栓塞性疾病。此文就AT-Ⅲ在人体中的主要功能以及在临床治疗中的作用做简要综述。

α1抗胰蛋白酶（α1- antitrypsin，AAT）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，其缺乏所致的AAT缺乏症（AAT deficiency, AATD）可引起肺部和肝脏疾病。目前治疗AATD相关的肺部疾病的常用方法是静脉注射人血AAT制剂，一些治疗AATD的新方法也在不断开发。此文就AATD的治疗研究做一综述。

此意见书取代2006年WHO关于白喉疫苗的意见书，介绍了白喉疫苗的特性、免疫原性、效果、安全性、保护作用持续时间、同时接种和WHO对白喉疫苗接种及与其他疫苗同时接种的意见。

第15届癌症免疫治疗（CIMT）协会年会于2017年5月10—11日在德国美因茨举行，来自世界各地的科学家和CIMT协会会员出席会议，对癌症免疫治疗的过去、现状和未来进行了介绍和探讨。此文概述了癌症治疗部分领域的研究状况。

目的  观察国产麻腮风联合减毒活疫苗（麻腮风疫苗）的稳定性。方法  取24批上海生物制品研究所有限责任公司（上海公司）2008－2017年生产的麻腮风疫苗，按照国家食品药品监督管理局批准的麻腮风疫苗注册标准和中国药典的要求进行各项检定：在0个月进行热稳定性试验；在0和18个月进行鉴别试验，外观、水分、无菌、异常毒性检查，牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量（2010年10月以后）、细菌内毒素（2013年12月以后）、pH值和渗透压摩尔浓度检测（2015年12月以后）；在0、6、12、18个月进行病毒滴定。同时对新、老车间生产的各3批疫苗进行加速稳定性与长期稳定性试验，重点考察水分和病毒滴度。结果  麻腮风疫苗在有效期内各项指标检定结果均符合注册标准和药典要求。质量可比性研究结果显示新老车间生产的疫苗质量相似。疫苗中水分都不高于3.0%，麻疹、腮腺炎、风疹病毒滴度分别为3.3～4.3 、4.6～5.6 、3.3～4.3 半数细胞培养感染量/ml。结论  上海公司10年间生产的麻腮风疫苗质量稳定、安全有效。

目的  验证口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）中庆大霉素残留量的检测方法。方法  应用庆大霉素ELISA试剂盒建立庆大霉素残留量的检测方法。对该方法标准曲线的线性、线性范围内的准确度、精密度、专属性、耐用性、检测限及定量限进行验证。结果  验证的标准曲线线性良好，相关系数>0.98。该法检测高、中、低浓度的庆大霉素标准品的回收率为92.7%～123.6%；检测同一批次的供试品的相对标准偏差为8%；不同试验人员检测同一批次供试品和不同批次试剂盒检测同一批次供试品，相对标准偏差均<15%；庆大霉素加样回收率为95.9%～121.3%；该法在（37±1） ℃温度范围内耐用性良好；该法测定庆大霉素的检测限为0.040 ng/ml，定量限为0.135 ng/ml。结论  用于检测口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）中庆大霉素残留量的方法是有效的。

目的  建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliovirus vaccine，sIPV）D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法，用于sIPV的体外效力评价。方法  以纯化D抗原分别免疫西门塔尔牛和BALB/c小鼠，获得牛免疫血清和小鼠单克隆抗体（单抗）杂交瘤细胞株，以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备单抗腹水。牛血清和小鼠腹水分别经沉淀和亲和层析后得到纯化牛多克隆抗体（多抗）和小鼠单抗。以多抗为包被抗体、单抗为检测抗体进行配对筛选，建立D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA。对方法的线性、范围、特异性、准确度、精密度以及在sIPV制备过程中样品检测的适用性进行验证。结果  纯化多抗和单抗均具有中和抗体活性，纯度分别达到80%和90%以上。经抗体配对筛选，确定3H10、901、1H10作为检测抗体，分别用于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA的建立。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型包被抗体的使用浓度分别为1:8 000、1:8 000、1:10 000， 3H10、901、1H10检测抗体的使用浓度分别为1:10 000、1:20 000、1:10 000。建立的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测方法的检测范围分别为0.4~13.0、0.4~12.0和0.4~20.0 DU/ml，线性回归决定系数≥0.99。该法能特异性检出D抗原，与C抗原、不同型别D抗原以及生产过程中的其他物质无交叉反应。用该法对高、中、低浓度样品进行测定，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型测定值/理论值（×100%）分别为97%～111%、91%～104%和95%～102%、相对标准偏差分别为≤7%、≤9%和≤10%；采用该法检测sIPV生产过程中的样品，显示出抗原纯化趋势。结论  建立了脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法，可有效用于sIPV的体外效力评价。

目的  验证荧光灶试验（fluorescence focus assay，FFA）作为测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度方法的可行性。方法  采用FFA法测定轮状病毒G1、G2、G3、G4、G8、G9型滴度，并验证该法的专属性、精密度、线性、准确性、范围和耐用性。 结果  各型病毒均可与对应的单克隆抗体（单抗）发生特异性荧光灶反应，不与抗异型病毒单抗发生交叉反应。试验内和试验间测定结果的相对标准偏差均小于5%。各型轮状病毒实测滴度与理论滴度间的线性相关系数均≥0.99。不同稀释度各型病毒的回收率为90%~120%。改变病毒培养时间对检测结果没有影响。该法的定量限为：G1、G2、G3、G4、G8、G9型滴度分别>2.8、>4.2 、>3.7、>3.6、>4.1和>4.2 lg荧光灶单位/ml，均符合六价轮状病毒疫苗的质控要求。结论  该法测定不同型轮状病毒滴度具有较好的专属性、精密度、线性和准确性，可用于六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的测定。

目的  对磁珠法结合定量PCR（quantitative PCR，qPCR）检测肠道病毒71型灭活疫苗〔非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）〕（EV71疫苗）中宿主DNA残留量进行适用性验证及应用。方法  利用微磁珠与蛋白溶液中DNA的特异性结合，来提取样品中残留的Vero细胞DNA。将已知浓度Vero细胞DNA对照系列稀释后，作为标准品DNA与提取的DNA同时进行qPCR扩增。根据标准品DNA的循环阈值与浓度之间的线性关系，对未知样品中残留DNA进行定量分析。结果  标准品检测范围在0.03～3 000.00 pg/反应。该方法的标准曲线决定系数≥0.98，扩增效率在90%～110%。质控样品回收率在50%～150%，相对标准偏差均小于30%。实验结果的各项参数均在要求范围内。结论  磁珠法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点，qPCR能够简便、快速、准确地对生产过程样品的EV71疫苗中DNA残留量进行定量测定。适用于EV71疫苗中DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制，对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。

目的  建立用于检测血清中水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus，VZV)特异性抗体的膜抗原荧光抗体（fluorescent antibody to membrane antigen，FAMA）试验并对其进行验证和评价。方法  用VZV感染细胞作为抗原制备抗原载玻片，以异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG为二抗建立FAMA试验。对试验的灵敏度、特异性和重复性进行验证。用FAMA试验和市售ELISA试剂盒对200份血浆样品中的抗VZV抗体进行检测。采用Spearman秩相关检验对两种方法的检测结果进行比较。结果 FAMA试验的灵敏度为0.04 IU/ml，与常见的人疱疹病毒（单纯疱疹病毒1和2型、人巨细胞病毒）没有交叉反应且重复性良好。经FAMA试验检测，200份血浆样品的抗体阳性率为93.5%，抗体几何平均效价为1:18.1，检测结果与市售ELISA试剂盒的符合率为90.0%。两种方法的检测结果具有相关性，Spearman秩相关系数为0.49，P<0.000 1。结论  建立的方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性，可用于血清中抗VZV抗体的检测。

人肠道病毒具有高度传染性，可引起多种疾病。目前多种肠道病毒灭活疫苗、减毒活疫苗已通过安全性评价上市；亚单位疫苗、DNA疫苗、病毒样颗粒疫苗的研究已获得较好的结果。此文旨在对人肠道病毒及其流行病学特征，以及相关疫苗的研究进展做一综述。

 柯萨奇病毒A组6型（coxsackievirus A6，CA6）是引起非典型手足口病、疱疹性咽峡炎的主要病原体，重症可出现神经及心、肺系统症状等。自2012年后，CA6因在我国多个省市呈现替代肠道病毒71型或CA16成为引起手足口病主要病原体的趋势，而引起关注。此文就CA6的流行病学、实验室诊断、动物模型及疫苗研发进展进行综述。

从古至今人类一直与病毒做斗争，天花、麻疹等病毒性疾病蔓延曾造成大规模的人类死亡，病毒性疫苗的使用使病毒性疾病的发生和流行得到了有效的预防、控制。全球已成功消灭天花，我国已消灭天花和脊髓灰质炎，麻疹、腮腺炎、风疹、乙型脑炎等传染病的发病率和病死率均有95%以上的下降。病毒性疫苗作为预防、控制病毒性传染病的重要手段，对保障人类健康发挥了巨大的作用。改造传统疫苗和研发新型疫苗是病毒性疫苗的发展趋势，同时开发含病毒性疫苗的联合疫苗亦日益受到重视。

此文取代2009年WHO关于乙型肝炎疫苗的意见书。文件提供了乙型肝炎疫苗及其贮存、运输和使用的最新资料。建议涉及疫苗接种的目标人群和适当的接种程序，强调对所有婴儿出生时接种疫苗作为全球预防HBV相关疾病最有效措施的重要性。

2017年9月—2018年1月，全球分离到2009年大流行甲型H1N1（甲型H1N1pdm09）、甲型H3N2和乙型流感病毒。对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明，甲型H1N1pdm09流感病毒与疫苗病毒A/Michigan/45/2015密切相关，血凝素基因序列分析表明最近流行的大多数病毒属于进化亚枝6B.1。大多数新近分离的甲型H3N2流感病毒的抗原性和遗传性与3C.2a参考病毒相似。大多数新近分离的乙型流感病毒为B/Yamagata/16/88谱系病毒，抗原性与鸡胚培养病毒B/Phuket/3073/2013更密切相关。

美国国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所（NIAID）于2017年6月28－29日在美国马里兰州的洛克维尔召开了关于通用流感疫苗途径的研讨会，探讨通用疫苗研制过程中的知识空白并制定相应的解决策略。

目的  采用蚀斑纯化法筛选对小鼠无神经毒力的乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）/登革病毒（dengue virus，DENV）1型嵌合病毒（JD1）纯化株，分析影响JD1小鼠神经毒力的相关位点。方法  将JD1在乳地鼠肾细胞中进行3轮蚀斑纯化，检测JD1纯化株对小鼠的脑内神经毒力。然后提取无神经毒力纯化株的基因组RNA，用逆转录PCR分段扩增全基因组序列并进行序列测定。将测序结果分别与原DENV-1 的前膜-包膜蛋白和JEV骨架病毒株SA-14-14-2的基因序列进行比对。选取2个无神经毒力纯化株进行小鼠免疫保护实验。采用单侧t检验对结果进行比较。结果  经过3轮蚀斑纯化后，获得大、中、小3种蚀斑形态的6个JD1纯化株。3个纯化株对小鼠无神经毒力，小鼠脑内注射后全部存活；1株神经毒力较弱，70%以上小鼠存活；2株具有强神经毒力，小鼠全部死亡。测序结果显示，对小鼠无神经毒力的3个纯化株存在2处相同的氨基酸突变。将其中2个纯化株JD1-PP-61和JD1-PP-31腹腔免疫小鼠后，再用1 000半数致死量DENV-1鼠脑适应株进行脑内攻击。JD1-PP-61能较好地保护小鼠抵抗病毒攻击，仅20.0%小鼠死亡（t=7.237，P<0.001）；JD1-PP-31保护效果稍弱，41.9 %小鼠死亡（t=4.752，P<0.01）。结论  通过蚀斑纯化筛选出对小鼠无神经毒力的JD1纯化株，并发现了可能与神经毒力减弱相关的位点。