目的  在大肠杆菌中表达具有生物活性的人胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor， GDNF）蛋白。方法  从人胶质瘤组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（reverse transcription PCR,RT-PCR）方法扩增出GDNF DNA片段，并将经双酶切后的GDNF基因片段直接与表达载体pET28a+连接，构建重组表达载体pET28a-GDNF，再将其转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达；采用分子筛层析法对表达产物进行纯化；用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对其纯度进行鉴定。结果  酶切和测序证实，PCR扩增出GDNF基因片段为GDNF成熟肽编码序列；表达产物的SDS-PAGE显示，相对分子质量16 000处有一新增蛋白带。结论  本研究所构建的原核表达系统可表达人GDNF。

目的  对A、C、Y和W135 4个不同血清群脑膜炎球菌菌株的16S rRNA、PorA和PorB基因进行序列分析，从分子水平对其做出鉴定。方法  提取脑膜炎球菌基因组DNA为
模板，设计特异性引物进行16S rRNA、PorA和PorB基因的PCR扩增并测序。结果  A、C、Y和W135群4个菌株的16S rRNA基因序列与GenBank中奈瑟菌属的脑膜炎球菌的同源性最高。4个菌株的PorA基因分型分别为P1.5-2,10; P1.7-1,1; P1.5-1,2-2; P1.5,2。PorB基因分别与porB3-26、porB2-40、porB3-100和porB3-25同源。结论  从基因水平分析表明4个菌株属于脑膜炎球菌，并在PorA和PorB基因分型上有差异。

目的  调查分析目前国内常见养殖淡水鱼类肠道菌群对不同抗生素的耐药性现状。方法  选取两种常见养殖淡水鱼类的粪便标本，分别在添加了7种抗生素〔青霉素G、头孢呋辛钠、庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素和复方新诺明（SMZ）﹞的琼脂平板上进行培养，通过PCR法分析所获得的耐药菌株的16S rRNA基因序列并对其种属进行鉴定。采用χ²检验作两种鱼之间的比较。结果  筛选后共得到2956株耐药菌，对青霉素G、头孢呋辛钠、四环素、SMZ、庆大霉素、红霉素和环丙沙星的平均耐药率分别为8.89%、1.57%、0.28%、0.06%、0.08%、0.07% 和0.11%。用单纯随机法挑选71株耐药菌，培养鉴定后其主要组成为：气单胞菌31株（43.66%）、不动杆菌8株（11.27%）、假单胞菌6株（8.45%）、金黄杆菌6株（8.45%）。两种鱼肠道菌群对青霉素G、头孢呋辛钠、SMZ、红霉素和四环素的耐药水平差异有统计学意义（χ²值为129.06、212.54、7.76、8.62 和35.40,P值均<0.05）。结论 通过获得两种常见养殖淡水鱼类肠道菌群对7种抗生素（青霉素G、头孢呋辛钠、庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素和SMZ）的耐药率，为今后进一步研究和追踪常见淡水鱼肠道菌群耐药率的变化提供了基础。

 乙型肝炎（乙肝）疫苗接种者中约有5%～10%的接种者呈现乙肝疫苗无/低应答。影响机体对乙肝疫苗应答的因素包括遗传因素、机体免疫功能、个体一般因素、疾病感染及不良生活习惯等。

 严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome, SARS）是由 SARS 相关冠状病毒(SARS-associated coronavirus，SARS-CoV) 引起的一类严重的急性呼吸系统传染病。目前尚未研制出治疗SARS的有效药物，防范SARS-CoV感染最有效的方法是使用疫苗。正在研制的SARS疫苗有灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗等，这些疫苗在动物模型中取得一些进展，有的已进入人体试验。此文就近几年有关SARS疫苗的研发现状做一综述。

脑心肌炎病毒是一种人畜共患病病毒，其宿主范围很广，可引起动物脑心肌炎，亦可感染人类。目前，脑心肌炎病毒疫苗的研究正在日益受到重视。此本就脑心肌炎病毒疫苗研究进展进行综述。

基因治疗是随着现代分子生物学技术的发展而诞生的一种生物医学治疗技术，主要涉及载体、目的基因和靶细胞三方面。将目的基因导入靶细胞，得到稳定高效的表达是基因治疗的关键问题，因而选择合适的载体是基因治疗成功的基础。目前应用的载体主要包括病毒载体和非病毒载体两类，此文就近几年来有关基因治疗载体的研究作一简要综述。

黑素瘤是一种难治性恶性肿瘤，近年来其发病率有增高趋势,增高速度超过其他肿瘤。临床研究显示,干扰素α(IFNα)作为高危黑素瘤手术切除后的辅助治疗药物能有效延长患者无复发生存时间,但是大剂量IFNα治疗可引起明显不良反应。此文介绍了IFNα辅助治疗黑素瘤患者的临床试验，并讨论了减轻IFNα不良反应的药物和方法,诸如聚乙二醇IFNα和联合治疗等。

梅毒是一种严重危害人民健康的性传播疾病，了解并掌握梅毒螺旋体检测方法对早期发现和控制梅毒具有重要的意义。此文就梅毒螺旋体检测方法及其临床应用作一综述。

 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）感染引起的传染病，主要经过血液传播。全世界有1.7亿人感染了HCV, 我国HCV感染人数达3800万，而且每年的新发病例数仍在不断上升。为了解衡阳市无偿献血人群中的HCV感染情况,我们对2008年全年3万多名无偿献血者的HCV感染指标（抗-HCV）进行了分析,现报告如下。

此文介绍了全球消灭脊髓灰质炎（脊灰）前广泛使用的两种脊灰疫苗的安全性、免疫原性、现场效果、保护作用持续时间等，以及WHO对脊灰疫苗的意见。

 目的  了解宁波地区肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）流行株VP1基因特征。方法   采集手足口病患者的样本进行病毒分离和鉴定，用逆转录-聚合酶链反应对EV71流行株VP1进行扩增和测序。对流行株VP1进行进化分析，并将流行株VP1与各基因型代表株进行序列比对。同时测定EV71 流行株的半数组织培养感染量（median tissue culture infective dose，TCID50）。结果  2008—2009年，宁波地区分离出23株病毒，鉴定后其中6株为EV71。EV71 流行株VP1进化分析显示，6株EV71流行株与C4亚型代表株聚于同一分支，流行株VP1的核苷酸和氨基酸序列与C4亚型代表株的同源性最高，分别为92.0%～93.1%和98.9%～99.3%。6株EV71流行株的TCID50为101.16～103.33 TCID50/ml。 结论  2008—2009年宁波地区EV71流行株属于C4亚型。

目的  观察b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b，Hib）760705株在连续传代过程中的稳定性。方法  将Hib 760705株工作种子批菌种连续传代，对第5、第8、第10代Hib培养物进行全面检测，包括培养特性（X和V因子生长试验、卫星试验）、染色镜检、生化反应，以检测第5、第8、第10代Hib的生物学特性。同时采用血清凝集试验和聚合酶链反应荚膜分型方法进行b型荚膜多糖稳定性检测。结果  Hib 760705株工作种子批培养物在连续传代过程中具有典型的细菌学特性，能够稳定地产生b型荚膜多糖。结论  Hib 760705株有明确的来源和背景，可以稳定传代，具备作为Hib结合疫苗生产用候选菌株的条件。

目的  建立制备蛋白微球的机械剪切法。方法  在不同工作条件下制备蛋白微球，通过检测微球大小、稳定性及其他质量指标来确定最佳工作条件。结果  当将起始制备温度设定为65 ℃、转定子转速调至15 000 rpm时，机械剪切法可制备最稳定、质量最佳的蛋白微球，且可获得最高蛋白微球产量。结论  机械剪切法可用于蛋白微球的规模化生产。

 丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是引起丙型肝炎的主要原因，目前，检测HCV感染的常用方法包括HCV RNA直接检测、HCV核心抗原检测和抗-HCV检测。HCV抗原抗体联合检测方法是一种同时检测HCV抗原和抗-HCV的新型酶免疫检测方法，可以缩短抗体阳转前的检测窗口期。此文就HCV抗原抗体联合检测方法研究进展作一综述。

理想的登革热疫苗应该是副作用小，可以诱导持久的抵抗4个血清型登革病毒感染的保护作用，并且价格合适。登革病毒E蛋白结构域Ⅲ介导受体连接作用并可诱导特异性中和抗体。此文主要介绍利用E蛋白结构域Ⅲ来开发登革热疫苗的研究进展。

 益生菌广泛存在于自然界中，通过维持宿主体内菌群平衡、影响肠屏障功能和调节免疫应答等作用，提高宿主健康水平，被公认为“肠道健康卫士”。一些益生菌可以增强机体的免疫功能，抑制致癌物质，影响瘤细胞的基因表达，对肿瘤具有拮抗作用。大量研究表明，益生菌在未来的肿瘤防治中有很好的应用和发展前景。

鼻疽杆菌和类鼻疽杆菌属假单胞菌属，所致疾病分别为鼻疽和类鼻疽，主要流行于澳大利亚北部、泰国和新加坡，中国、北美等其他国家和地区也有散发病例报道。易获取、易播散、治疗困难和缺乏疫苗使得这类细菌有可能被用作生物武器，美国国立卫生研究院（NIH）和美国疾病控制预防中心（CDC）将这两类细菌列为B类病原体。当前各国正在积极开发疫苗，但由于这两种病原体的特殊性致使疫苗研究困难重重，脂多糖抗体被证实有一定保护作用，但是菌毛、外膜蛋白及Ⅲ型分泌系统因子相关的疫苗的保护性并不令人满意。此文主要阐述这两类细菌疫苗的研究进展。

在治疗性药物的研发中，效应分子与人免疫球蛋白IgG1 Fc片段或人血清白蛋白形成的融合蛋白疗效不变，但体内半衰期明显延长、药物耐受性增加、副作用减少。在疫苗研发中，抗原分子与毒素分子或Fc形成的融合蛋白是很好的新型疫苗，并能激发细胞免疫。

2010年6月，WHO在日内瓦举行了第三次关于利用聚合酶链反应（PCR）检测甲型流感病毒亚型的工作组会议。与会人员包括来自WHO流感参考与研究合作中心、WHO H5参考实验室、主管实验室、国家流感中心以及世界动物卫生组织-联合国粮农组织动物流感专家网络的代表。会议的目的是讨论检测方案的更新，新PCR检测试剂盒的可获得性和新诊断技术的使用，以及对流感的监测活动、实验室室间质量评估、病毒耐药性和有关甲型流感病毒的人类血清学研究。

遏制结核病全球合作伙伴组织（Stop TB Partnership）成立于2000年，旨在消除结核病这一全球公共卫生问题。该组织于2010年发布了2011―2015年遏制结核病全球计划，新的行动计划为消除结核病奠定基础。本文侧重介绍新的全球计划中有关新型结核病疫苗研发策略和目标。

此文概述了2010年2月17日—9月26日甲型H5N1和甲型H9N2流感疫情、甲型H5N1流感病毒的抗原性和遗传学特征以及可用于人类疫苗的病毒研制状况。

目的  构建表达甲型H1N1流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）抗原的DNA疫苗，并在小鼠中测试其免疫原性。方法  运用人密码子优化技术合成甲型H1N1流感病毒HA序列，并转移至DNA疫苗载体，用Western blotting检测其表达效率。采用单纯随机抽样方法把BALB/c小鼠分成DNA疫苗组和对照组。用DNA疫苗免疫疫苗组小鼠，免疫后取小鼠血清和脾细胞，分别用ELISA方法和酶联免疫斑点试验（ELISPOT）方法检测血清中的特异性抗体应答和脾细胞中的特异性T细胞应答，最后用血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI) 试验和假病毒中和试验分别检测血清中的HI 抗体和中和抗体应答。结果  所构建的DNA疫苗能够高效表达HA蛋白。免疫小鼠后能有效活化T细胞免疫应答[429.0±113.4 斑点形成细胞（spot-forming cell, SFC）/106脾细胞]，血清结合抗体滴度为16127.0±2698.0, HI抗体滴度为100.8±16.9，所有数据均显著高于载体对照（分别为t =3.863, P=0.0042; t =5.734, P=0.0002; t =6.018, P=0.0001）。DNA疫苗能活化产生高水平的针对同源H1N1毒株的中和抗体，但不能活化产生针对异源H1N1毒株的中和抗体。结论  本研究构建的DNA疫苗有较好的免疫原性，并能诱导一定水平的保护性抗体产生。

目的 观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异,同时观察免疫对异亚型病毒攻击后的保护情况.   方法 用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免疫雌性BALB/c小鼠,同时分别以H5N1灭活疫苗免疫小鼠以及PBS腹腔注射处理小鼠作对照.采用ELISA方法分别对各组小鼠免疫后血清特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a水平进行检测,以PR8病毒鼻腔攻击后观察小鼠体重变化情况和生存率.采用t检验作组间比较.    结果 与PBS处理组相比,无论以何种方式免疫H5N1疫苗,免疫后特异性IgG及其亚类水平均明显升高(t=7.4004,P<0.01),以联合MF59后诱导的特异性抗体水平最高.其中疫苗单独免疫组和联合M59免疫组IgG2a水平升高明显,联合纳米化MF59免疫小鼠后IgG2a水平有所下降,IgG1水平有所升高;联合铝佐剂组以IgG1升高为主.攻毒后各组小鼠体重均出现下降,但疫苗单独免疫小鼠以及疫苗与佐剂联合免疫小鼠于攻毒后期体重恢复接近正常或者正常.PBS处理组小鼠攻毒后全部死亡,佐剂联合免疫组小鼠存活率100%,而疫苗单独免疫小鼠存活率为70%.   结论 H5N1疫苗无论是单独免疫或是联合不同佐剂免疫均可诱导较高水平的特异性抗体产生,有非常好的免疫原性.H5N1灭活疫苗诱导的抗体亚类以IgG2a为主,MF59以及纳米化MF59也以诱导IgG2a亚类为主,但纳米化MF59可诱导更均衡的免疫应答.联合铝佐剂或纳米化铝佐剂免疫小鼠后均可诱导以IgG1亚类为主的抗体应答.联合两种佐剂均可对小鼠产生很好的异亚型保护.

目的  客观评价济源市2009年扩大国家免疫规划疫苗的报告接种率，并分析其影响因素。方法  按卫生部《预防接种工作规范》规定，运用比较法、差值（D）和比值（R）法进行评价。结果  济源市2009年扩大国家免疫规划疫苗基础免疫报告接种率和调查接种率均>95%。乙型脑炎疫苗、A群脑膜炎球菌多糖疫苗的调查接种率均高于调查合格接种率。D值评价，除乙型肝炎疫苗为可疑外，其余疫苗均为不可信，但所有疫苗的估算接种率均高于报告接种率。R值评价，全市有3个单位出现不可信结果。结论  在进行D值和R值评价时，应充分考虑到超生儿童及流动儿童对结果的影响。此外，应进一步完善和提高常规免疫接种率报告系统和报告质量，提高专业报告人员的工作责任心和业务素质；并经常开展接种率报告评价，及时发现和查明数据偏差的原因。

 人轮状病毒是引起婴幼儿腹泻最常见的病原体，疫苗接种是降低轮状病毒疾病发病率的有效方法。此文简要介绍了轮状病毒疾病的流行病学和临床特征，并对口服轮状病毒减毒活疫苗的保护效果做一综述。

  黏膜是人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）侵入机体最主要的途径之一，评价黏膜免疫应答对评价HIV疫苗效果至关重要。用于检测不同动物模型和人体黏膜免疫应答的方法不尽相同，检测方法包括黏膜取样方法、样品保存、黏膜标记物种类和检测，因此，建立统一的抗HIV黏膜免疫应答评价系统具有重要的意义。

 加拿大研究发现，季节性流感疫苗接种增加2009年大流行甲型流感(H1N1)感染的危险性，而澳大利亚研究未能证实这个发现。雪貂实验结果表明，以前的季节性流感感染能防御大流行甲型流感(H1N1)，但以前的季节性流感疫苗接种则不能。模型研究显示， 流感感染可导致对不同亚型的暂时性免疫。这些观察可以解释加拿大和澳大利亚的不一致发现。澳大利亚近期没有季节性流感流行，因而对大流行流感没有暂时性免疫。季节性流感疫苗与大流行流感感染无关。加拿大大流行流感流行前有季节性流感流行，未接种疫苗的人群由于罹患季节性感染而获得对大流行流感的暂时性免疫，但接种疫苗的人群未罹患季节性感染而不能产生对大流行流感的暂时性免疫，因而看来似乎季节性流感疫苗接种增加了2009年大流行甲型流感(H1N1)感染的危险性。

鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus, MCMV)的基因组结构、基因表达模式、细胞嗜性和感染进程等都与人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）有很多相似之处，因此，常使用MCMV感染模型研究HCMV的相关疾病及致病机制。此文主要对近年来国际上对MCMV感染模型研究中与病毒感染相关的特异性细胞免疫功能机制的研究新进展做一综述。

前列腺癌是一种常见的恶性肿瘤，易复发，其治疗多采用手术加放疗化疗方法。近年来，动物实验和人体临床试验表明，DNA疫苗是治疗前列腺癌的一种安全有效的方式。本文主要阐述了DNA疫苗靶向的前列腺癌抗原以及优化疫苗的方法，并提出了治疗前列腺癌新策略。

肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）主要感染5岁以下儿童，是手足口病的主要病原体之一。由于EV71具有高度的嗜神经性，因此，EV71感染能并发严重的神经系统疾病，包括致死性脑炎、无菌性脑膜炎、脑脊髓炎。此文就EV71诱导细胞凋亡的途径和分子机制进行综述。

 2010年9月—2011年1月，全球分离到甲型H1N1、甲型H3N2、甲型H5N1和乙型流感病毒。北半球有甲型H1N1pdm09流感广泛暴发。南半球甲型H1N1pdm09流感疫情普遍较轻，甲型H3N2流感病毒为主要病毒。对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明，甲型H1N1pdm09流感病毒呈抗原同质性，并与疫苗病毒A/California/7/2009密切相关。甲型H1N1pdm09流感病毒的序列分析表明，病毒属于抗原性不能区别的3个遗传亚群。许多新近分离的甲型H3N2流感病毒的抗原性与疫苗病毒A/Perth/16/2009密切相关。大多数B/Victoria/2/87谱系病毒的抗原性与疫苗病毒B/Brisbane/60/2008密切相关。

目的  建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（meningococcus，Men）多糖疫苗（groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine，MPV4）多糖含量的火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis，RIE)法。方法  分别用A、C、Y、W135群Men菌液、A、C、Y、W135群Men菌液加佐剂、A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔，制备特异性抗血清。将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板，并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE。以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程。采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小。结果  菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想。在确定的电泳条件下，建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系，相关系数值均大于0.98。该法特异性较好，未检出各多糖间的交叉反应。采用该法测定3批MPV4多糖含量、分子大小及回收率的结果均与先前的检定结果相符，均符合质控标准。结论  建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法。

 目的   研制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）检测试剂盒（酶标法）。方法  以一株特异性抗VEGF单克隆抗体作为捕获抗体，另一株单克隆抗体作为检测抗体，通过棋盘滴定法确定两抗体的最佳浓度组合。制备冻干VEGF165参考品，并对样本稀释液、封闭液等实验条件进行优化。检测自制试剂盒的特异性并对其进行初步应用。结果  棋盘滴定法确定捕获抗体的质量浓度为10 μg/ml，检测抗体的稀释倍数为1:20 000。冻干VEGF165的质量浓度为720~880 pg/ml，样本间变异系数＜10%。以5%牛血清白蛋白作为封闭液和样本稀释液最为合适。自制试剂盒与10种细胞因子均无交叉反应，具有较高的特异性和灵敏度。结论  成功研制出VEGF检测试剂盒。