目的 用基因工程方法获得HIVp24蛋白编码区基因片段,构建重组质粒,并在大肠杆菌中高效表达目的 蛋白. 方法 设计带有酶切位点的引物,扩增p24基因,分别连接到pET-11c和pET-16b载体上,将两种表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达.选择离子交换层析和分子筛层析纯化p24. 结果 p24在大肠杆菌中高效表达,p24在非还原性电泳中呈单一条带,提示有较好的立体结构,p24-pET-16b的表达量占到总蛋白表达量的30%.经纯化后蛋白纯度达到90%以上.  结论 p24能在大肠杆菌中高效表达.

目的 了解分别用Al(OH)3佐剂、生理盐水配制Hib结合疫苗和A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫持久性.   方法 分别用两种稀释液配制Hib结合疫苗和A、C群脑膜炎球菌结合疫苗,各自免疫小鼠,采集分离血清用ELISA测定血清IgG抗体滴度,计算血清抗体GMT和阳转率及不同免疫针次的免疫持久性.  结果 两种稀释液配制的Hib结合疫苗和A、C群脑膜炎球菌结合疫苗均可产生明显的抗体应答和免疫记忆反应,但在刺激机体快速产生免疫应答,加强免疫后的回忆反应,抗体滴度及免疫持久性方面有明显差异.生理盐水配制的结合疫苗较Al(OH)3盐水配制的结合疫苗可刺激机体快速产生抗体应答,但Al(OH)3盐水配制的结合疫苗具有更好的抗体GMT和免疫持久性.  结论 Al(OH)3盐水配制的结合疫苗具有较好的免疫原性.

目的 了解2004-2006年间鹰潭市民被狗、猫、鼠等动物咬、抓伤后接种狂犬病疫苗的效果.   方法   对被动物咬、抓伤者全程接种狂犬病疫苗后15～20 d以ELlSA方法测定血清抗狂犬病抗体.   结果 在全程接种狂犬病疫苗的961名被动物咬、抓伤者中,抗体阳性893人,阳性率为92.9%.≥60岁组与＜60岁组间的抗体阳性率差异有统计学意义(X2=5.716,P＜O.01).   结论   被动物咬、抓伤者及时接种狂犬病疫苗是控制狂犬病的重要手段.

目的 研制白喉抗体定量试剂,用于白喉疫苗免疫后抗体水平监测.  方法 采用双抗原夹心法原理,用白喉抗体国家参考品为定量依据,建立ELISA定量检测系统.  结果 试剂经系统优化后,检测抗体浓度在10～120 IU/L之间,呈良好的线性关系(r=0.996).精密度(CV)≤4.6%.实际应用验证,用ELISA试剂对不同年龄组的检测结果显示,白喉抗体水平的变化趋势与国家计划免疫程序密切相关.在白喉疫苗效力检定中,用ELISA试剂直接测定免疫后小鼠的抗体水平与Vero细胞法测定结果之间具有良好的相关性(r=0.974).  结论 该试剂可用于白喉抗体的定量检测.

HIV-1 Tat蛋白在病毒基因的复制、表达及AIDS的发病中起重要作用;Tat蛋白本身结构的特点也使其成为HIV疫苗研究的新靶点.但在Tat疫苗研发过程中也遇到了诸多问题,如诱导的抗体滴度低,对病毒变异株抗原交叉反应性差而导致对异源性病毒攻击的防御效果不佳,不能引起足够的细胞免疫应答等.目前新研发的Tat Oyi疫苗在提高抗体效价、交叉反应性和细胞免疫应答等方面有明显效果.本文就以上相关方面内容作一综述.

狂犬病是目前世界上许多发展中国家的一个严重问题,因此迫切需要建立和推广与狂犬病病毒(rabies virus,RV)有关的快速、实用的检测方法.本文简要介绍了几种传统的RV抗体检测方法,系统阐述了近期发展的一些RV抗体检测方法的原理及特点,以及与WHO推荐的RV中和抗体检测方法对比的统计学分析,并对RV中和抗体检测技术进行了综合评价.

人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染所致疾病倍受现代医学重视.HCMV pp65蛋白既是HCMV致病的关键因素,也是激发抗HCMV保护性免疫的主要成分.本文就HCMV pp65蛋白的致病性、免疫性及其在HCMV感染的诊断、治疗和预防方面的作用进行综述.

抗CD20单克隆抗体即利妥昔单抗(rituximab,RTX),1997年被美国FDA批准用于治疗低度恶性B细胞非霍奇金淋巴瘤,是第一种获准用于治疗人类肿瘤的单克隆抗体.近年来,RTX在自身免疫病方面的应用受到广泛关注.鉴于RTX治疗类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、特发性血小板减少性紫癜已有较多的论述,本文就RTX在其他自身免疫病中的治疗应用研究进行概述.

蛋白质和多肽类药物是生物技术药物中重要的一类,如重组人IFN、重组人粒细胞集落刺激因子、重组人IL等.然而这些药物体内半衰期相对较短,临床上需要反复给药以维持血药浓度稳定,从而给患者带来不便和经济负担,研发长效蛋白和多肽类药物则是一个改良趋势.长效药物是半衰期延长、药效得到改善的一类新型药物,是在原有药物基础上进行修饰获得,它的研制成功降低了临床给药频率,提高了患者的依从性.

2007年11月2日,在日本东京召开了第16届肠道菌群国际研讨会,会议主题为肠道菌群与胃肠道防御系统.本次会议由日本文部省支持,Yakult生物科学基金会主办.来自全球20多个国家的近500名学者参加了此次会议.会上各国学者互相交流学术内容,探讨有关肠道菌群与胃肠道防御系统间的相互作用,并为以后的研究以及学术交流起到了积极的促进作用.

2005年10月11～12日在美国马里兰州贝塞斯达召开了一次疫苗效力测定研讨会,会议由美国国立卫生研究院AIDS室、微生物学和传染病室、国家变态反应和传染病研究所疫苗研究中心(VRC)和AIDS研究办公室,与美国FDA生物制品评价和研究中心、国际AIDS疫苗倡议组织以及WHO/联合国AIDS规划署共同组织.这次会议除了重点讨论疟疾、结核病和HIV/AIDS疫苗的效力测定方法外,还讨论了其他疫苗的新型效力测定方法,大会试图在更普遍的意义上解决与所有这些新疫苗相关的关键问题.

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)为细小病毒科的一种自主复制病毒,它能持续感染哺乳动物细胞系,在持续感染期间细胞系照常生长,但在某些理化因素的刺激下,病毒会突然引起细胞病变,导致细胞死亡.这种持续感染对以细胞为材料的生物制品生产是十分危险的,它会带来意想不到的污染.因此,中国药典及WHO规程均要求生产用原材料胰蛋白酶必需经过PPV检测.PPV的检测方法很多,我们拟用一种简单、灵敏并且特异的方法来检测原材料胰蛋白酶.

 Karam 医生问:患儿是1名具有正常出生史的白种女婴,接受母乳喂养且生长良好.她在2月龄时接受了常规免疫接种,包括肺炎链球菌结合疫苗(Prevnar)、轮状病毒疫苗(Rotateq)、DTaP(Daptacel)、b型流感嗜血杆菌结合疫苗(ActHib)、乙型肝炎疫苗(Recombivax HB)和脊髓灰质炎疫苗.她在接种后马上啼哭,几分钟后安静下来即离开诊所.

目的 评价重组人干扰素β1b(recombinant human interferon β1b,rhIFN-β1b)活性标准品在不同贮存温度条件下的稳定性.  方法 检测在不同贮存温度(37 ℃、室温、4和-20 ℃)条件下放置不同时间段的rhIFN-β1b活性标准品的外观、溶解性、水分、pH值及生物学活性.  结果 活性标准品分别在4种温度条件下放置90周生物学活性都没有降低的趋势,并且没有明显差别,同时水分、pH值等都符合规定.  结论 说明辅料配方合理,可有效保护rhIFN-β1b,减少其降解,活性标准品稳定性良好.

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)不仅促进骨髓细胞的增殖分化,还可富集免疫部位的抗原呈递细胞,增强细胞功能,激活一系列免疫活性细胞,明显增强疫苗的免疫效能.GM-CSF作为佐剂,以蛋白或编码质粒等形式被广泛应用于疫苗研究,对DNA疫苗免疫效能的影响引起广泛关注.本文综述了近年来GM-CSF用于DNA疫苗研究的进展状况.

 乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生乳酸的革兰阳性菌的统称.作为重要的益生菌,乳酸菌已被广泛应用到食品工业、生物制药、疫苗研制等各个领域,是公认安全的食品级微生物.随着基因工程技术的发展,乳酸菌已被广泛用作基因工程宿主菌,用于表达多种生物多肽和蛋白,并成为向黏膜免疫系统递送抗原的理想菌株.抗原的细胞定位可影响其免疫原性,近年来一系列递送系统的建立,可将异源蛋白和抗原靶向表达于乳酸菌胞质、细胞壁和胞外培养基.本文就重组乳酸菌这三种抗原递送方式及其对蛋白表达量和免疫原性的影响作一综述.
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1969年,美国Gotschlish等采用十六烷基三甲基溴化铵提取脑膜炎球菌的大分子多糖抗原,成功制备荚膜多糖疫苗,证明免疫效果良好.然而,多糖疫苗对婴幼儿的免疫原性较弱,因而人们研制了单价和多价多糖一蛋白结合疫苗,目前部分结合疫苗已进入临床或上市.鉴于B群脑膜炎球菌多糖的免疫原性极弱,人们开发了外膜蛋白疫苗.研究表明,部分外膜蛋白疫苗对婴儿及儿童有较好的免疫原性及安全性.此外,通过基因工程技术研制DNA疫苗也不失为预防脑膜炎球菌感染的一种免疫策略.

霍乱至今仍然是威胁人类健康的重要传染病,迫切需要一种有效的疫苗.O1群El Tor生物型霍乱弧菌临床分离株全基因组序列的可利用性,使人们在霍乱研究中进行基因组功能分析成为可能,从而有助于识别保护性免疫应答的细菌性靶标,并由此推进新一代霍乱疫苗的研发.

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染引起的一种严重威胁人类健康的世界性传染病,目前还没有研制成功有效的预防性疫苗.随着对HCV免疫清除机制的逐步认识,诱导交叉反应性中和抗体和细胞免疫应答已成为丙型肝炎疫苗研究的基本方向.本文概述了当前丙型肝炎疫苗研究的进展.

 对于HIV-1,抗逆转录病毒药物能显著改善HIV/AIDS病人的健康并延长其寿命.但高昂的费用和治疗条件令大多数HIV患者望而却步,尤其在感染水平高、公共资源极度匮乏的发展中国家.到2004年底,撒哈拉以南非洲地区有2540万HIV感染者,该地区迄今仍是HIV-1C感染最严重的地区.几种候选HIV-1C疫苗目前正在进行临床前和临床研究.这些候选疫苗的设计主要是来自HIV-1C的HIV-1调控蛋白和结构蛋白.本文重点介绍HIV-1C疫苗的研究进展.

宫颈癌仅出现在感染特异性、高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的妇女,这一发现促进了非细胞学宫颈癌预防策略的发展.用灵敏的分子手段检测HPV可显著提高对高度恶性宫颈癌前期损害的检测能力.防御HPV 16和18型引起的宫颈癌的预防性HPV疫苗已开发成功.本文讨论怎样更好地将HPV DNA检测和HPV疫苗纳入宫颈癌预防工作,给妇女提供最大裨益并降低全球宫颈癌负荷.

microRNA(miRNA)是一种非编码的单链小分子RNA,广泛存在于真核生物中.它通过在转录后水平负调控基因的表达,参与生命过程中的一系列重要进程.近来研究发现,miRNA可能通过调控某些致癌基因和抑癌基因,参与肿瘤的发生和发展.因此,通过寻找与肿瘤相关的miRNA,可以为肿瘤的诊断和生物治疗提供新的靶标.

CD22抗原是表达于B细胞的一种跨膜唾液酸糖蛋白,对B细胞的生长、发育及功能的维持具有重要作用.CD22抗原还可高表达于异常活化的B细胞及B细胞来源的恶性肿瘤细胞表面.Epratuzumab是人源化抗CD22单克隆抗体,与CD22结合,通过诱导靶细胞调亡、启动抗体依赖性细胞介导的细胞毒性以及抑制靶细胞的增殖等机制,来治疗自身免疫病及恶性B细胞肿瘤.因为具有高效、低毒、半衰期长等特点,Epratuzumab将在未来的临床治疗中发挥重要作用.

人生长激素是脑垂体前叶分泌的一种蛋白类激素,主要生理功能为刺激代谢、促进蛋白质合成和脂肪分解.最初,人生长激素是经人尸体的脑垂体获取,随着生物技术的发展,开发了重组人生长激素,它不仅产量大,而且安全可靠.重组人生长激素是美国FDA批准用于促进儿童生长的唯一有效药物,对各种生长发育迟缓均有确切疗效,而且它在成人中也有广泛的应用.为使人生长激素的使用更加方便,多种剂型的开发也势在必行.

2006年6月5-26日濮阳市疾病预防控制中心共接到25例接种无细胞百白破疫苗(DTaP)引起局部或全身反应的报告.为了全面了解发生原因,避免接种反应进一步发生,消除家长对接种该疫苗的顾虑,中心组织人员对出现严重不良反应的儿童进行了调查.现将调查结果报告如下.

目的 研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)19417株体外对小细胞肺癌细胞NCI-H446及正常人胚肺成纤维细胞HFL-1的杀伤作用.  方法 应用四甲基偶氮唑盐比色法检测NDV D417株对NCI-H446和HFL-1的杀伤效应.D417株感染NCI-H446后,于光镜和电镜下检查细胞病理变化.  结果 NDV D417株对NCI-H446有杀伤作用,杀伤作用与病毒剂量和作用时间呈正相关.13417株对HFL-1也有杀伤作用,但比同等条件下对NCI-H446的杀伤作用弱.D417株感染NCI-H446后光镜下可见细胞病变及细胞融合现象,电镜下可见细胞呈凋亡形态.  结论 NDV D417株对小细胞肺癌细胞有较强的杀伤作用,对正常细胞影响较小.

目的 比较重组人干扰素ε(recombinant human interferon-ε,rhIFN-ε)Cys¹⁵⁵和rhIFN-εSet¹⁵⁵两种蛋白质的回收率和抗病毒活性,以研究155位Cys突变成Ser对IFN-ε纯化和生物学活性的影响.  方法 对rhIFN-εCys¹⁵⁵和rhIFN-εSer155两种蛋白质分别进行纯化和抗病毒活性鉴定,并进行数据比对.  结果 得到rhlFN-εCys¹⁵⁵和rhlFN-ε Ser¹⁵⁵两种活性蛋白,回收率分别为15.41%和29.18%,抗病毒活性分别为(1.293±0.268)×10⁵IU/mg和(1.026±0.172)×10⁵IU/mg.   结论 两种蛋白质相比.突变样品回收率明显高于未突变样品,但氨基酸突变对rhlFN-ε的抗病毒活性没有明显影响.

目的 建立组分V沉淀收率与原料血浆蛋白质含量关系的数学模型.   方法 利用SPSSl3.0软件包对553批经低温乙醇蛋白分离法分离的人血浆组分V沉淀收率资料进行回归分析,拟合曲线方程,并用所建模型对77批血浆分离组分V沉淀收率进行实例验证.   结果 当原料血浆蛋白质含量范围为49.0～62.9 g/L时,采用三次方程曲线拟合方法建立的方程为(Y)=82.522+6.148X-0.626X²+0.023X³,作拟合优度检验,决定系数R²=0.947,自变量X能在94.7%的程度上对应变量(Y)作出解释,模型拟合非常好,方差分析表明:F=59.193,P=0.000,模型成立,对组分V沉淀收率的预测值符合实际组分V沉淀收率的分布.   结论 处于不同范围内的原料血浆蛋白质含量与组分V沉淀收率之间的曲线关系成立,理论估计值与观察值分布一致,此模型的建立有利于血液制品生产过程中物料平衡的控制.

轮状病毒能够广泛、频繁地导致重症腹泻的发生,是目前世界范围内导致两岁以下婴幼儿严重腹泻病的首要病原体.近年来,有关人轮状病毒基因组结构及功能的研究倍受关注,本文对其作介绍.

带状疱疹是由以前的水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)感染再度激活而引起,主要发生于老年人和免疫系统功能障碍者,可能是VZV特异性细胞介导免疫力减弱或丧失所致.目前治疗带状疱疹和疱疹后神经痛的方法包括抗病毒剂和止痛药,随之带来较高的经济费用.一些临床试验已证实0ka/Merck株VZV减毒活疫苗(ZostavaxTM)是安全的,能增强VZV特异性细胞介导免疫力,并能在60岁以上人群中显著降低带状疱疹和疱疹后神经痛的发生率.该疫苗最近已通过审批,一旦使用,可望明显减少带状疱疹发病和与之相关的费用.

 诱导中和抗体是许多有效疫苗的关键特征,也是在动物模型中唯一证明能完全阻断HIV感染的免疫应答.但是,HIV-1广泛的遗传变异性和复杂的免疫逃避机制,已经使得迄今为止所有利用HIv-1疫苗免疫原诱导有效中和抗体应答的尝试受到阻碍.最近对病毒免疫逃避机制有了进一步了解,同时对病毒包膜糖蛋白结构和免疫生物学特性的研究也不断深入,这些都将有助于克服困难,设计出新的免疫原诱导产生保护性抗HIV-1抗体.

 自2003年以来,已有250多人感染H5N1禽流感,均导致了严重的疾病和/或50%以上死亡率.合法和非法的家禽流动可携带高致病性H5N1病毒跨越长距离,从而使病毒在宽广的地域中传播.除了疫苗接种者的免疫状况以外,疫苗类型、抗原含量、接种方式、接种剂次及佐剂的使用都将影响疫苗的免疫应答.政府、疫苗生产企业和研究机构应该联合起来进行基础研究和临床试验,以决定能诱导最适免疫应答的疫苗配方、浓度和接种剂次.急需抓紧时间制备合适的大流行流感疫苗.

 脑膜炎球菌引起的侵袭性疾病继续在全世界范围内威胁人类的健康.虽然流行病学显示疾病呈现全球性变化,但是大多数疾病是由A、C、Y和W135群引起的.MenactraTM是预防A、C、Y和W135群的四价脑膜炎球菌-白喉类毒素结合疫苗(MCV-4),美国已批准其在11～15岁人群中使用.MCV-4的临床试验结果表明:疫苗可以诱导与保护作用相关的强烈免疫应答,疫苗诱生的抗体能持续3年.且机体能对加强免疫产生免疫记忆应答.疫苗具有良好的耐受性,最常见的不良反应是短暂轻微的注射部位反应和头痛.

 纳豆激酶是一种由纳豆芽胞杆菌产生的碱性丝氨酸蛋白酶,具有高效抗血栓、口服易吸收、无副作用等优点.本文对纳豆激酶的分子结构、生化特性、提取、分离与纯化等方面进行了综述,重点讨论了纳豆激酶的固体和液体发酵及层析法分离纯化,并介绍了纳豆激酶的最新研究进展.

 Fms样酪氨酸激酶受体3(FLT3)配体(FL)是一种与造血调控有关的早期造血生长因子,可与多种细胞因子协同作用.FL与FLT3结合后能够调节原始造血干/祖细胞增殖和分化,动员和刺激髓系及淋巴祖细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤树突状细胞增殖和分化,是树突状细胞最为重要的生长因子.本文就FL的主要生物学特性以及临床应用等方面的研究进展作一综述.

目的 探索在无血清条件下Vero细胞和流感病毒在反应器中的培养条件.  方法 采用5 L反应器,接种经无血清适应的不同代次Vero细胞,观察细胞生长情况.以不同感染复数接种流感病毒,观察病毒的生长情况.  结果 细胞在反应器中生长繁殖成功,4 d左右达到平台期,增殖倍数为5～16.接种甲型流感病毒后72 h,病毒血凝滴度达到高峰(1/64～1/128).   结论 在无血清条件下,细胞和流感病毒都能在反应器中成功培养.

目的 对2004-2006年上海市麻疹暴发、流行的野毒株进行基因特征分析和分子流行病学研究,为提出更好的免疫策略,实现麻疹消除目标提供科学依据. 方法 采集的血清用ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体;用Vero/SLAM细胞对采集的咽拭子标本进行病毒分离,分离到的麻疹病毒株用RT-PCR方法扩增其核蛋白基因C端的部分序列,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,以C端456个核苷酸为目的 片段进行基因亲缘性关系分析.  结果 2004-2006年上海市疾病预防控制中心对148例疑似麻疹病人的血清进行麻疹IgM抗体检测,132份血清阳性,148份咽拭子中分离到66株麻疹野病毒,阳性率分别为89.2%和44.6%.病毒分离阳性标本的对应血清麻疹IgM抗体检测均为阳性.分离到的66株麻疹野毒株均为H1基因型,除Shanghai04-5为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型.所有分离毒株之间的核苷酸同源性为95.8%～100%,氨基酸同源性为95.8%～100%.所有毒株与中国疫苗株S191的核苷酸同源性为91.2%～93.2%,氨基酸同源性为86.8%～90.1%;与疫苗株Changchun-47的核苷酸同源性为92.5%～93.4%,氨基酸同源性为88.2%～91.4%.  结论 引起2004-2006年上海市麻疹暴发、流行的野毒株为HI基因型,并以H1a为绝对优势亚型.上海市2005年和2006年可能都有一个主传播链的存在.