2024年, 第47卷, 第6期 刊出日期：2024-12-10
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 337-342. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240410-00014目的 建立基于大鼠淋巴瘤细胞株（Nb2-11细胞）增殖的人生长激素（human growth hormone，hGH）注射液生物学活性检测方法并进行方法学验证。方法 采用发光活细胞检测系统测定hGH刺激细胞增殖的情况，并利用四参数拟合分析计算样品相对效价。通过对分析培养基配方（含1%、5%、10%马血清）、细胞处理方式（细胞饥饿处理24 h与细胞不作饥饿处理）及细胞铺板密度（5 000 、8 000个/孔 ）的筛选建立检测方法。依据中国药典2020年版四部通则9401，选择专属性、准确度、精密度、线性、耐用性和范围6个验证参数对方法进行验证。结果 采用以下条件得到的曲线拟合最优：含5%马血清的分析培养基、细胞饥饿处理24 h、8 000 个/孔铺板密度。hGH制剂缓冲液对检测结果无影响；线性回归方程为y=0.942 8 x + 0.072 6，决定系数为 0.980 9，线性范围60%~140%；不同活性样品的单次实验回收率均在70%~130%之间；验证实验测定结果之间的变异系数均＜20%。结论 建立了hGH注射液生物学活性检测方法，该法专属性、准确度、精密度、线性、耐用性较好，可用于hGH注射液生物学活性检测。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 343-348. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240529-00036目的 对自制的兔源5型肺炎球菌特异性血清参考品进行质量控制检测，用于23价肺炎球菌多糖疫苗生产过程中的过程样品检测。方法 采用双光径速率浊度免疫分析系统非竞争性浊度模式进行检测，依次考察5型血清的工作浓度及线性、交叉情况、与市售血清的可比性、室间室内检测差异以及工作浓度下的稳定性。结果 4批自制5型血清工作浓度最大稀释倍数分别为75、20、30、8倍，对应工作浓度下，多糖浓度在0.625~4.000 μg/ml范围内与响应值呈现良好线性关系，线性相关系数均＞0.985；4批5型血清参考品与其余22个型别均无交叉现象，特异性良好；与市售血清的可比性考察中，5批血清（包括市售血清）同时检测3个不同厂家上市疫苗中的5型多糖含量的变异系数均小于5%，4批自制5型血清与市售血清重均分子量降低后的检测结果无明显差异；室间、室内检测结果变异系数均＜10%；工作浓度的4批5型血清在2~8 ℃均可在至少1个月内保持良好稳定性。结论 自制的兔源5型肺炎特异性血清效价高、线性良好、无交叉，与市售血清具有可比性，工作浓度下稳定性良好，可用于肺炎5型多糖疫苗的多糖含量检测。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 349-354. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240415-00015目的 研究肺炎球菌多糖结合疫苗中各血清型肺炎球菌在液体培养基中传代培养的稳定性。方法 在液体培养基中对各代次肺炎球菌的培养时长进行对比；对第15代次（P15）与P4（对照组）进行菌种检定与荚膜多糖抗原基因序列分析；将P15菌种按生产工艺进行发酵培养，分析培养情况和荚膜多糖抗原产量及质量，与P4代次对比。结果 在P7—P15中，各代次培养时长相近，且P15菌种检定、抗原基因序列与P4相比无差异，序列相似度为100%；P15菌种发酵培养后，菌体生长、荚膜多糖产量与荚膜多糖相关检定指标与P4无明显差异，且均符合中国药典质量标准。结论 用于生产肺炎球菌多糖结合疫苗的各血清型肺炎球菌在液体环境中传代培养稳定。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 355-359. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240529-00035目的 采用6B型肺炎链球菌为试验血清型别，比较植物源性和动物源性培养基应用于23价肺炎球菌多糖疫苗规模化生产的效果。方法 采用大豆胨培养基和胰酪蛋白胨培养基各进行3批生产规模的试生产，检测肺炎球菌生长情况，在各工艺阶段采用速率比浊法测定多糖含量并计算回收率，将收获的精制多糖按照23价肺炎球菌多糖疫苗制造及检定规程进行检定，同时进行核磁共振检测，进行系统的比较分析。结果 与胰酪蛋白胨培养基相比，6B型菌种在大豆胨培养基中的细菌浓度和发酵液中的多糖含量分别提高了22.5%和88.7%；生产的粗糖及精制多糖的产量平均增长了66.87%和139.67%；精制多糖各项质量指标均符合要求，2种精制多糖的核磁图谱指纹区一致，且化学位移和峰型与文献报道图谱一致。结论 大豆胨培养基与胰酪蛋白胨培养基生产的6B型肺炎球菌多糖疫苗精制多糖在质量上具有可比性，且大豆胨培养基能提高精制多糖的产量。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 360-364. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240419-00017目的 通过对中试研发洁净区环境菌进行监测、收集及鉴定，建立洁净区环境菌库。方法 对中试研发洁净区进行环境监测，将收集到的环境菌（沉降菌、浮游菌和表面微生物）采用形态观察、染色镜检结合基因型微生物鉴定（细菌16S核糖体RNA测序分析）的方式进行鉴定。结果 共分离到89株环境菌，涵盖16个属，其中芽孢杆菌属占29%，葡萄球菌属占27%，微球菌属占12%。结论 初步建立中试研发洁净区环境菌库，为开展微生物污染溯源提供技术支持。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 365-370. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240612-00041目的 比较不同信号肽序列对流感病毒血凝素（hemagglutinin, HA）在Sf9昆虫细胞中分泌性表达的影响。方法 以H1N1亚型流感病毒A/Victoria/2570/2019（IVR-215）的HA 为靶标，选取全长HA基因序列，在其5´端分别连接天然信号肽、蜂毒素信号肽、糖蛋白67信号肽（glycoprotein 67 signal peptide, Gp67sp）、几丁质酶信号肽、人肝素结合蛋白信号肽，分别克隆至pFastBac1转移质粒基因组；通过Bac‐to‐Bac系统构建5种重组杆状病毒，并通过杆状病毒滴度测定试剂盒检测病毒滴度；将重组杆状病毒以不同的感染复数感染Sf9细胞，在感染后不同时间收获细胞上清液，通过免疫印迹法检测蛋白表达水平，优化HA分泌性表达的条件。结果 收获的5种重组杆状病毒的滴度均大于106 PFU/ml。Sf9细胞能够正确表达HA，相对分子质量为80 000左右。Gp67sp介导的HA表达量较高；当重组杆状病毒AcMNPV-Gp67sp-HA以感染复数5.0或10.0感染Sf9细胞96 h时，HA的表达量最高，血凝效价为256 凝血单位/50 μl。结论 研究选择的外源信号肽均能引导流感病毒HA在Sf9细胞中的分泌性表达，其中Gp67sp更加有利于HA的高效表达。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 371-377. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240530-00037目的 在生产以Vero细胞为基质的液体人用狂犬病疫苗过程中，添加不同厂家的核酸酶，筛选合适的核酸酶处理条件，评价该条件下液体人用狂犬病疫苗的安全性。方法 温度25 ℃、37 ℃下，向病毒液中加入酶解浓度为0.15、0.30 U/ml的核酸酶，经层析系统纯化后采用β-丙内酯灭活，制备成原液及成品。采用PCR法和ELISA分别检测原液DNA残留量和核酸酶残留量，筛选出酶解温度和酶解浓度；采用PCR法分析原液中Vero细胞残留DNA片段和检测残留量；通过NIH法检测成品的效价来评价免疫原性，开展SD大鼠单次给药毒性试验和大耳白兔肌肉刺激性试验评价产品安全性。结果 筛选酶解浓度为0.15 U/ml，酶解温度为25 ℃；残留DNA符合中国药典2020年版要求，核酸酶残留量在试剂盒检测下限0.2 ng/ml以下；残留DNA大于221 bp片段占DNA总残留量的比例少于25%；大鼠毒性试验和大耳白兔给药后未见异常，组织病理学检查均未见病理学改变。结论 筛选到合适的酶解温度和酶解浓度，可将Vero细胞的DNA酶解成较小的片段，降低Vero细胞DNA残留量；动物安全性试验评价安全可靠，为Vero细胞基质疫苗的研发与应用奠定理论依据。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 378-383. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240428-00019目的 调查HBV表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)阳性母亲所生低体重儿HBV感染及血清学动态变化趋势，分析该类极特殊儿童HBV感染情况及免疫效果。方法 选取六安市24家医院或产科在2016—2021年出生的HBsAg阳性母亲所生低体重儿，分类统计姓名、性别、体质量、早产、及时接种乙型肝炎疫苗（hepatitis B vaccine，HepB）和接种剂数等，采用磁微粒化学发光法定量检测HBsAg和HBV表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）浓度，分析比较抗体阳性率和抗体几何平均浓度（geometric mean concentration，GMC）。结果 研究共纳入172名低体重儿，其中121名完成了血样采集，平均年龄为（3.7±1.7）岁，体质量中位数为2.30 kg，早产儿占58.68%，HepB首针及时接种人数占75.21%，完成HepB基础免疫与加强免疫的对象分别有117、4人，HBV感染率为5.79%。在未感染对象中，加强免疫组与基础免疫组的HBsAb GMC差异有统计学意义，Z=-2.17，P=0.026；在未感染HBV且仅完成基础免疫的调查对象中，及时接种HepB、早产、出生体质量均不影响GMC。HBsAb阳性对象中，基础免疫组与加强免疫组相比，阳性率差异无统计学意义（χ2=2.45，P=0.118），但2组间GMC差异有统计学意义（Z=-2.25，P=0.024）。在仅完成基础免疫且未感染HBV的对象中，HBsAb阳性率和GMC随接种时间延长而总体呈下降趋势。结论 六安地区HBsAg 阳性母亲所生低体重儿的HBV感染率较高，HepB接种率较低，HBsAg和HBsAb总水平较低，需加强低体重儿的HepB 0-1-2-7月龄免疫程序的实施。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 384-389. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240613-00042有效的临床试验进度管理可以提高疫苗临床试验效率、节约成本。通过考察分析，此文识别了临床试验进度管理面临的诸多挑战和5个关键影响因素：科学的试验设计、合理的资源分配、有效的受试者管理、准确的数据管理以及严格的监管合规，提出了相应的进度管理策略，包括详尽的项目计划、定期的进度监控与及时调整、资源配置优化、沟通与协调机制的优化，以及利用先进技术以增强数据管理和透明度，旨在为疫苗临床试验管理提供理论依据与策略工具，指引研发团队优化临床试验的整体管理。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 390-396. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20231222-00026病毒检测技术可根据原理不同分为电子显微镜（电镜）观察、细胞培养、免疫学方法、核酸检测等。电镜观察法具有超高的分辨率可直接观测到病毒结构，适用于对新现未知病毒的研究；细胞培养法可直观地得到病毒活力信息，可用于病毒滴度的检测；免疫学方法特异性强且成本低、速度快，适用于大规模的群体筛查；核酸检测灵敏度高、特异性更强，且允许同时检测多种病毒。研究者需要在方法的选择上需要做出权衡。此文论述不同病毒检测方法的优缺点，并讨论其适用情况，以为制定更准确、高效的病毒检测和防控策略提供参考。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 397-402. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20231113-00017婴幼儿是罹患流感的高风险人群，接种流感疫苗是预防流感最经济有效的方式。当前我国儿童流感疫苗按病毒型别区分有三价型、四价型；剂型有半剂量（7.5 μg血凝素/0.25 ml）和全剂量（15 μg血凝素/0.5 ml）。研究发现，婴幼儿接种年龄与免疫应答水平呈正相关，增加抗原含量可提升流感疫苗对婴幼儿的免疫效果。我国在近年开始上市应用于婴幼儿的全剂量四价流感疫苗。此文从婴幼儿罹患流感的疾病负担、流感疫苗接种现状、流感疫苗保护效果、免疫原性及安全性、接种意愿等方面，阐述全剂量四价流感疫苗在我国婴幼儿中的应用进展。
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国际生物制品学杂志. 2024, 47(6): 403-407. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20240527-00033HPV是1种广泛存在于自然界的DNA病毒，持续性感染HPV可导致多种癌症，尤其是宫颈癌的发生。HPV疫苗的研发和接种对于预防宫颈癌及其他相关癌症具有极其重要的意义。近年来，随着科学技术的进步，HPV疫苗研发取得了显著进展。目前在全球市场上有二价、四价和九价3种HPV疫苗，二价和四价疫苗可以预防近70%与HPV相关的宫颈癌和癌前病变，九价疫苗可以提供近90%的保护。此文就HPV疫苗的研究进展进行综述。
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