2023年, 第46卷, 第6期 刊出日期：2023-12-10
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 307-314. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230103-00002目的 对冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）进行动物肌内单次给药毒性、肌内重复给药毒性伴随局部刺激性和免疫原性、主动全身过敏性评价，以考察其安全性。方法 采用ICR小鼠肌内注射单次给药毒性试验评价制品的急性毒性；采用SD大鼠和食蟹猴肌内注射6周重复给药毒性伴随局部刺激性、免疫原性试验评价制品的长期毒性；采用豚鼠主动全身过敏试验评价制品的致敏性。结果 ICR小鼠单次肌内注射，所有动物未见与疫苗相关的异常反应，疫苗的最大耐受量>125 国际单位（international unit, IU）/kg，为临床拟用剂量的3 472.2倍，等效剂量的268.8倍；除伴随的轻度局部刺激反应外，SD大鼠6周重复给药毒性伴随局部刺激试验和免疫原性试验的安全剂量为37.5 IU/kg，为临床拟用剂量的1 041.7倍，等效剂量的182.0倍；食蟹猴最大无毒性反应剂量为1.875 IU/kg，是临床拟用剂量的52.1倍，等效剂量的18.0倍；疫苗剂量为0.1剂（0.05 ml/只）和1剂（0.5 ml/只）时，豚鼠主动全身过敏反应结果均为阳性。结论 冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）显示出良好的安全性，但肌内给药可能引起过敏反应，临床应用需密切关注。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 315-322. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230306-00022目的 研制以Vero细胞为生产基质的SA14-14-2乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗候选毒株。方法 将SA14-14-2株原始病毒在Vero上传代并进行空斑克隆，对克隆株病毒进行Vero细胞培养，使用3周龄小鼠及3日龄乳鼠对脑内致病力进行测定，并进行乳鼠脑内回传、弱毒稳定性实验及免疫力实验等。结果 挑选到10个病毒克隆株，通过全面对比后，筛选到1株病毒滴度高（＞6.0 lgPFU/ml）且稳定的毒株SA14-14-2 VC6。将该株与SA14-14-2原始株进行主要指标对比，结果表明，VC6株全基因序列与原株相比仅有1个位点发生突变（S66L），对小鼠和乳鼠脑内致病力、弱毒稳定性、免疫原性均与原株相同。结论 筛选到的SA14-14-2 VC6株符合中国药典乙脑减毒活疫苗生产毒种的要求。各项主要指标不劣于SA14-14-2生产用毒种，是可应用Vero细胞培养生产的乙脑疫苗候选株。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 323-327. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20221222-00086目的 探索以阳离子脂质体为载体和佐剂的HBV DNA疫苗的免疫效果。方法 用阳离子脂质体包裹HBV DNA疫苗pVAX/HBs形成脂质-pVAX/HBs复合物，肌肉注射免疫小鼠，同时分别注射质粒pVAX/HBs和pVAX1。在初次免疫前和初次免疫2周后每周对免疫小鼠眼眶采血，检测小鼠血清中乙型肝炎表面抗体的效价，并用流式细胞仪检测免疫小鼠脾脏细胞中CD4+、CD8+ T细胞数量。结果 脂质-pVAX/HBs组小鼠抗体水平高于pVAX/HBs组，且差异有统计学意义（t=3.92, P<0.01），CD4+ T细胞数量和CD4+/CD8+也均高于pVAX/HBs组及pVAX1组，且差异有统计学意义(F=4.67，P<0.05)。结论 阳离子脂质体可显著增强HBV DNA疫苗的体液免疫和细胞免疫效果。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 328-332. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230213-00011目的 验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白（host cell protein，HCP) ELISA定量检测方法。方法 使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒，测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP，并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性、耐用性、检测限及定量限。结果 2种抗狂犬病毒单抗发酵液稀释10 000倍后检出的HCP含量分别为31.42和19.36 ng/ml。制剂溶液、HEK293F和E.coli培养上清液中未检出HCP。 3种浓度的HCP加标供试品的加标回收率均在80%~120%之间。3种浓度的HCP加标供试品重复性检测结果及中间精密度检测结果相对标准偏差均＜20%。分别对3次残余HCP检测绘制四参数标准曲线，决定系数均＞0.990。在一定范围内改变孵育时间和显色时间，HCP测定结果在合理的偏差范围内。检测限和定量限分别为2和3 ng/ml。结论 抗狂犬病毒单抗中HCP残留量的ELISA定量检测方法专属性、准确度、精密度、线性及耐用性良好。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 333-337. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230403-00030目的 调查活化凝血因子Ⅺ（activated coagulation factor Ⅺ, FⅪa）在静注人免疫球蛋白各个生产环节中的分布及含量，分析其在生产过程中的主要形成过程、去除过程及其影响因素。方法 采用底物显色法对合并血浆、组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ（fraction Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ，FⅠ+Ⅱ+Ⅲ）上清液、FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ上清液、FⅡ沉淀溶解液、FⅡ精制滤过液以及超滤配制后、低pH孵放后制品的FⅪa含量进行检测。添加硅藻土对合并血浆的FⅪ进行激活，将FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液采用双层滤纸过滤或离心进行FⅪa去除。结果 FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段合并血浆FⅪ被激活形成FⅪa，其激活量为合并血浆的2 500倍。FⅠ+Ⅲ分离阶段可去除合并血浆FⅪ活化后形成的约99.8%的FⅪa。结论 FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段为FⅪa形成的主要阶段，该阶段硅藻土启动内源性凝血途径形成FⅪa；FⅠ+Ⅲ分离阶段为FⅪa去除的主要阶段，该阶段废弃吸附了FⅪa的硅藻土以去除工艺中形成的FⅪa；硅藻土为FⅪa形成与去除的主要影响因素。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 338-342. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230109-00005目的 制备无动物源成分的肺炎链球菌冻干菌种，并保重菌种活力和菌种保藏时间。方法 采用单因素筛选、多因素复配及正交试验，观察肺炎链球菌在不同温度存放不同时间的稳定性，从冻干物外观，菌种活力方面进行评价。结果 确定保护剂配方为海藻糖20 g/L、大豆胨20 g/L、甘露醇60 g/L、甘油6 ml/L。制备的冻干菌种外观良好，菌种活力可达109 CFU/支，在2～8 ℃放置2年活菌数无显著下降。结论 开发的保护剂无动物源成分保护剂适用于冻干菌种制备。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 343-347. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230313-00024目的 比较猪源胰蛋白酶与重组胰蛋白酶对鸡胚细胞的消化效果，筛选出可替代猪源胰蛋白酶消化鸡胚细胞的最优方案。方法 对照组用质量百分数0.125%猪源胰蛋白酶溶液，实验组分别用质量百分数0.1%、0.2%、0.3%重组胰蛋白酶溶液按照验证参数消化鸡胚细胞15、20、25 min，进行细胞计数，并监测细胞活率。筛选出最优方案，制备单次病毒收获液，并与0.125%猪源胰蛋白酶对比滴度结果。结果 对照组平均活细胞密度为1.12×106 ml-1，平均细胞活率为95%；实验组最优鸡胚细胞消化条件为0.2%重组胰蛋白酶溶液消化20 min，平均活细胞密度为2.24×106 ml-1，平均细胞活率为97%。2组消化鸡胚细胞效果差异有统计学意义，t=19.65，P＜0.05。0.125%猪源胰蛋白酶组病毒滴度为（6.56±0.12）lgCCID50/ml，0.2%重组胰蛋白酶组为（6.89±0.10）lgCCID50/ml， t=6.78，P<0.05，病毒滴度结果差异有统计学意义。结论 以0.2%重组胰蛋白酶溶液消化20 min作为最优鸡胚细胞消化条件，可替代0.125%猪源胰蛋白酶溶液，为今后生产工艺分析研究及清真认证提供了数据和参考。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 348-353. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230215-00012目的 对无血清悬浮HEK293细胞培养表达狂犬病毒（rabies virus，RV）包膜糖蛋白（glycoprotien，G）的人腺病毒5型（adenovirus type 5，Ad5）重组病毒（Ad5-RVG）的条件进行优化。方法 以Ad5-RVG感染无血清悬浮培养的HEK293细胞，通过检测病毒收获液的感染活性粒子和总病毒粒子，比较不同补加新鲜培养基比例、感染复数、感染细胞密度、病毒培养时间及病毒培养温度等培养条件下的病毒产量，以确定重组病毒的最佳培养条件。结果 Ad5-RVG在无血清悬浮HEK293细胞上的最佳培养条件为：在1.5×106 ml﹣1的细胞密度下按感染复数10感染Ad5-RVG，并在病毒感染时补加≥50% 293SFM Ⅱ新鲜培养基，于（36±1） ℃、120 r/min培养44~56 h后收获病毒液。结论 确定了Ad5-RVG在无血清悬浮HEK293细胞上的最佳培养条件，为Ad5-RVG的大规模培养提供了重要的研究基础和数据参考。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 354-358. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230424-00034目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测（high performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector，HPLC-ELSD）法测定猪纤维蛋白原粉中海藻糖含量，并对方法进行验证和初步应用。方法 以乙腈/水(含0.1%NH4OH)(70/30 体积分数)为流动相、进样量10 μl、流速1.0 ml/min、柱温25 ℃、氮气流速2.0 L/min、漂移管温度85 ℃、Xbridge-NH2色谱柱对样品进行分离，采用蒸发光散射检测器测定海藻糖含量。验证该方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性，并应用该方法对3批猪纤维蛋白原粉样品中海藻糖含量进行检测。结果 该方法的空白对照、空白溶剂和空白溶液无干扰峰出现；海藻糖浓度在0.1 006~0.5 030 mg/ml时与峰面积线性关系良好；其中低、中、高3个浓度水平的总平均回收率为100.20%，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）＜5.0%；2名实验员各重复6次测定海藻糖结果的RSD分别为1.14%、3.10%；流速、流动相比例、柱温和漂移管温度等检测方法参数分别微调后与原方法测得的含量之比在97.90%~102.67%范围内。3批猪纤维蛋白原粉样品中海藻糖含量分别为63.10%、64.33%、64.16%，均符合企业标准，适用于海藻糖含量测定。结论 成功建立了猪纤维蛋白原粉中海藻糖含量的HPLC-ELSD检测法，该方法的专属性、线性、准确度、精密度、耐用性均良好。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 359-364. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20221011-00064目的 观察过氧化氢空间喷雾消毒技术用于GMP车间的空间消毒效果，为评估该方法在车间日常清洁消毒的实际运用提供依据。方法 选择GMP车间中空间体积和空间布局均有较大差异的3个洁净区域D、E和F，同时采用化学指示卡和生物指示剂判断法，分别观察过氧化氢干雾灭菌器采用不同消毒剂剂量在各个区域的空间消毒效果。结果 D区为直线型人物流通道，仅一侧分布功能性房间，最佳消毒剂剂量为6 ml/m3；E区为含少量拐弯的直线型人物流通道，两侧均分布功能性房间，最佳消毒剂剂量为8 ml/m3；F区为L型人物流通道，两侧均分布功能性房间，最佳消毒剂剂量为10 ml/m3。结论 过氧化氢干雾灭菌器的空间消毒效果能够达到中国药典2020年版四部规定的灭菌标准。其实际消毒效果与车间空间布局复杂程度呈负相关，与消毒剂的剂量呈正相关，即布局复杂的车间，通过适当增加消毒剂用量可提高空间消毒效果。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 365-367. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20221202-00082目的 评估全面开展病毒核酸扩增检测（nucleic acid amplification test，NAT）以来，采浆区域的献血浆人群经血传播HCV的残余风险。方法 分别用ELISA和NAT对21个单采血浆公司在2019.04.15—2020.04.14采集的1 487 050份血浆标本进行抗HCV抗体及HCV RNA筛查，对筛查出的抗HCV抗体阳性标本采用免疫印记法确证。采用发病率-窗口期模型计算献血浆者传播HCV残余风险。结果 重复献血浆人群的HCV感染率为0.004%，重复献血浆人群传播HCV的残余风险为7.938×10-2/10万份血浆标本，即1:1 259 830。结论 重复献血浆人群的HCV残余风险在较低、可控的水平。全面开展NAT后，与仅进行ELISA筛查相比，重复献血浆人群的HCV经血传播疾病残余风险有大幅降低。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 368-373. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230504-00038轮状病毒是引起儿童急性腹泻的主要病原体，目前尚无特效治疗药物，疫苗接种是最有效的预防措施。近年来，随着轮状病毒疫苗在全球的广泛使用，急性腹泻的发病率和死亡率逐年下降。目前已有6款轮状病毒疫苗批准上市，此外多种候选疫苗正处于研发阶段。此文对国内外轮状病毒疫苗研究进展进行综述，为进一步的研究提供参考。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 374-380. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20221118-00079佐剂作为免疫增强剂或递送系统已经成为疫苗相关领域研发的一大热点，其中水包油乳佐剂作为新型的佐剂体系，其安全性及有效性得到了广泛证实，部分已被批准用于人用疫苗。此文总结了已上市的及处于研发阶段的水包油乳佐剂的研究进展，为新型水包油乳佐剂的研发提供参考。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(6): 381-390. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230220-00018人类表皮生长因子受体3（human epidermal growth factor receptor 3, HER3）作为人类表皮生长因子受体家族中的一员，通过与其他受体形成异源二聚体发挥信号转导的功能。头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC）是全球第6大常见癌症，起病隐匿且总体生存率低。HER3在HNSCC中高表达。HER3的表达和激活与HNSCC治疗中靶向其他受体的药物〔例如靶向表皮生长因子的单克隆抗体（单抗）西妥昔单抗或程序性死亡受体1阻断剂〕以及某些化学治疗药物的治疗获得性耐药有关。目前，HER3已经成为HNSCC治疗非常有前景的候选靶点。此文综合近年来国内外对靶向HER3治疗在HNSCC中的研究，对HER3参与HNSCC肿瘤进程的机制、HER3与HNSCC当下临床治疗策略的关联，以及包括处于临床试验的11种单抗药物、5种双特异性抗体药物及其他多种类型的靶向HER3的药物在HNSCC治疗中的开发进展进行综述。
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