2023年, 第46卷, 第3期 刊出日期：2023-06-10
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 121-126. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220920-00061目的 在原核系统中表达金黄色葡萄球菌（金葡菌）锰转运蛋白C（manganese transporter C，MntC），对其免疫原性进行分析，为筛选金葡菌疫苗候选抗原提供参考。方法 合成MntC基因，克隆至pET-22b（+）载体，构建重组表达质粒pET-22b-mntc，转化至E. coli BL21（DE3），异丙基硫代–β–D–半乳糖苷诱导表达，镍柱纯化。将纯化产物进行免疫印迹法鉴定，再采用分子排阻高效液相色谱法进行纯度分析。将铝佐剂吸附重组MntC，免疫BALB/c小鼠作为实验组，将铝佐剂免疫BALB/c小鼠作为对照组。经ELISA检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平、中性粒细胞呼吸爆发试验检测小鼠血清特异性抗体功能，再用细胞因子试剂盒检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液中抗原特异性细胞因子水平。免疫后小鼠用致死剂量金葡菌49521菌攻毒，观察小鼠存活情况。结果 经双酶切及测序鉴定，重组表达质粒pET-22b-mntc构建正确。重组MntC相对分子质量约为34 000，以可溶性形式表达，可与抗His单克隆抗体特异性结合，纯度大于95%。将铝佐剂吸附MntC免疫小鼠可诱导产生高滴度特异性IgG抗体；经MntC免疫的小鼠血清能明显增强中性粒细胞对49521菌株的呼吸爆发，实验组在60 min内发光值均值比对照组提高78%；实验组脾淋巴细胞培养上清液中抗原特异性IFN-γ、IL-5和IL-17A浓度分别为对照组的5.8、9.9和62.8倍，均高于对照组且差异有统计学意义（t值分别为3.75、3.95和3.93，P值分别为0.004、0.003和0.003）；MntC免疫小鼠后以致死剂量49521菌株攻毒，小鼠生存率从1/6提升至2/3。结论 正确表达的重组MntC具有较好的免疫原性，可作为金葡菌疫苗的候选抗原组分。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 127-133. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220801-00046目的 研究不同链长的6A型肺炎球菌荚膜多糖（type 6A pneumococcal capsular polysaccharide，Pn6A）稳定性差异及链长对结合物稳定性和免疫原性的影响。方法 采用高压均质机获得不同链长的Pn6A，并在1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐作用下与破伤风类毒素-己二酰肼衍生物形成共轭结合物。通过比较原始多糖、多糖降解物及结合物的核磁共振氢谱验证结构的正确性，通过硫酸蒽酮法和速率比浊法定量比较抗原性；通过高效液相-分子尺寸排阻层析-多角度激光散射仪比较不同链长多糖的稳定性；分析结合物物理化学（理化）性质，并通过重均相对分子质量（weight-average relative molecular weight，Mw）变化及游离多糖变化比较结合物稳定性；用原始多糖和结合物分别皮下免疫NIH小鼠3次，ELISA检测抗多糖IgG水平。结果 Pn6A经机械剪切3、8、20次后，Mw由14.01×105 g/mol分别下降为1.55×105、0.92×105和0.58×105 g/mol，其对应结合物理化数据相近；核磁共振结果表明，多糖降解物和结合物各特征质子的化学位移相比原始多糖未发生改变；硫酸蒽酮法和速率比浊法定量计算得到的不同多糖和结合物单位抗原值相近；在不同pH及温度条件下，长链多糖及其结合物的Mw和游离多糖变化均大于短链多糖。不同链长多糖结合物免疫小鼠后诱导的IgG抗体滴度均高于原始多糖（F=2.90，P=0.048），而不同结合物之间的免疫原性差异无统计学意义（F=1.39，P=0.267）。结论 机械剪切不会破坏Pn6A化学结构和抗原性；Pn6A链长越短，所获得的多糖及结合物越稳定；Pn6A经机械剪切后制备的结合物在小鼠体内可诱导良好的免疫应答。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 134-140. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20221024-00072目的 研究绝对负压厂房对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliomyelitis vaccine，sIPV）质量的影响。方法 按照批准的生产工艺在绝对负压厂房生产sIPV Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型单价原液各3批，配制3批sIPV三价半成品并分装成3批成品。按照企业注册标准（企标）对原液、半成品和成品进行全项检测，并将有效性指标（D抗原含量、效力试验）检测结果与相对负压厂房生产、检验合格的相对应中间产品和成品检测结果进行对比分析。对绝对负压厂房生产的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型单价原液及成品进行2~8 ℃长期稳定性考察和25、37 ℃加速稳定性考察，以进一步确认该厂房对sIPV质量的影响。结果 绝对负压厂房生产的单价原液中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型D抗原含量分别为≥400、≥200、≥400 D抗原单位（D-antigen unit，DU）/ml，半成品中分别为48~84、54~90、82~128 DU/ml，成品中分别为24~42、27~45、41~64 DU/剂，各项检测结果均符合企标要求；供试品半成品半数有效剂量（50% effective dose，ED50）均高于参考品，且效力试验结果（供试品与参考品ED50比）均在警戒限内波动。相对负压与绝对负压厂房生产的sIPV原液、半成品、成品中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量及半成品效力试验结果的差异无统计学意义（t值分别为-0.96、-1.69、-1.07、1.61、-0.85、0.07、0.00、-0.66、-1.04、1.93、0.83、1.31，P值均＞0.05）。稳定性考察结果显示，在疫苗有效期内的各个考察时间点的所有检测结果均符合企标的要求。结论 绝对负压厂房生产的sIPV质量稳定、可控，未对疫苗质量造成影响。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 141-145. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220902-00058目的 了解西双版纳州乙型肝炎（乙肝）疫苗接种情况，评价乙肝预防效果，为制定免疫策略提供依据。方法 采取分层整群抽样法抽取西双版纳州3个县（市）0~34岁健康人群对象，收集其乙肝疫苗接种史，采集静脉血，用ELISA检测血清标志物乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）和乙肝表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）。阳性率的比较釆用卡方检验。结果 2016—2020年西双版纳州报告乙肝病例1 647例，年平均发病率35.48/10万。乙肝疫苗估算首针接种及时率为47.98%，全程接种率为55.26%。3 956名调查对象中，HBsAg和HBsAb阳性率分别为2.10%（95%置信区间：1.65%~2.54%）和65.72%（95%置信区间：65.24%~67.20%）。HBsAb阳性率男性高于女性，城区人群高于乡镇，且差异均有统计学意义（χ2分别为18.35、4.48，P值均<0.05）。3个县（市）HBsAg阳性率差异有统计学意义（χ2=11.51，P<0.01）。结论 西双版纳州农村人群乙肝免疫基础较为薄弱。薄弱地区应加强乙肝疫苗免疫接种工作，提高乙肝疫苗的接种率，做好乙肝疫苗免疫强化，完善慢性HBV感染者筛检、诊断、抗病毒治疗等综合防控措施。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 146-150. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220927-00063
目的 制备高效价兔抗新型冠状病毒血清并研究佐剂对抗体效价的影响。方法 将9只新西兰兔随机分为a、b、c组，分别皮下注射新型冠状病毒混合弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂或单磷酰脂A佐剂进行免疫，0、28、42 d各免疫1次。每次免疫前及初次免疫后14 d于耳中央动脉采血，初次免疫后49 d经颈动脉采血，分离血清，进行中和抗体效价检测以及中和试验。结果 经过整个免疫程序后，a、b、c组均能产生高效价抗血清，且a组（6 144.00）最终产生的血清中和抗体效价高于b组（4 437.33）、c组（3 754.67）；3组血清均可在中和试验中有效中和KMS2株新型冠状病毒，中和后培养细胞均未发生病变。结论 3种不同佐剂疫苗在新西兰兔体内均可产生高水平的免疫应答。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 151-155. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220725-00042目的 探索应用基于片状载体的150 L篮式反应器培养Vero细胞制备脊髓灰质炎（脊灰）病毒的工艺条件。方法 按照不同的细胞接种密度，将146代Vero细胞消化传代并接种至150 L篮式反应器中，在相同条件下培养，分时间段取样后，通过检测葡萄糖含量间接监测细胞代谢情况，绘制细胞生长曲线，确定150 L篮式反应器最佳细胞接种密度及反应器最佳培养条件。在150 L篮式反应器内接种Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型Sabin株脊灰病毒培养，分别通过生化分析仪、微量细胞病变法、ELISA检测一定条件下病毒培养12～96 h的葡萄糖含量、病毒滴度、抗原含量等参数，确定病毒最佳收获时间。结果 在基于片状载体的150 L篮式反应器细胞中培养Vero细胞的最佳细胞接种密度为1.5×105 ml-1；Vero细胞葡萄糖代谢量在培养120～168 h达到峰值（≥225 g/24 h），细胞密度最高且生长状态稳定。脊灰病毒接种48 h后，随着Vero细胞病变程度的增加，葡萄糖代谢逐渐下降；各型脊灰病毒滴度和D抗原峰值均出现在72 h左右。结论 确定了应用基于片状载体的150 L篮式反应器大规模制备脊灰病毒（Vero细胞）的工艺条件。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 156-160. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220806-00051目的 优化线性化聚乙烯亚胺（polyethylenimine linear, PEI）介导的高效瞬时转染条件，提高重组蛋白在人胚胎肾（human embryonic kidney，HEK）293F悬浮细胞中的瞬时表达效率。方法 构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）/pcDNA3.1+，通过瞬时转染的方式将质粒转入HEK293F细胞中进行表达。对转染试剂PEI与重组质粒的比例以及收获时间进行优化，通过倒置显微镜观察、SDS-PAGE和流式细胞仪检测目标蛋白的表达量，确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件。采用优化后的条件在T500摇瓶（工作体积为120 ml）中进行扩大表达。结果 构建的重组质粒EGFP/pcDNA3.1+序列正确，在重组质粒浓度为3.0 μg/ml、DNA∶PEI为 2∶1、转染后24 h添加终浓度为2 mmol/L的丙戊酸钠、转染后4 d收获条件下，目的蛋白的表达量最高。此条件也适用于放大培养体积至T500的瞬时转染。 结论 优化了一种快速有效的基于PEI的瞬时转染方法来高水平表达重组蛋白。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 161-164. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20230207-00009
2019年12月《中华人民共和国疫苗管理法》提出了药物监管部门向疫苗生产企业派驻检查员的要求，此文通过对国内外疫苗监督体系的比较，对上海3年来派驻检查工作实践情况进行梳理，总结相关经验，对未来还需完善和努力的方向进行讨论与展望。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 165-170. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210405-00016多发性骨髓瘤（ multiple myeloma，MM）是由浆细胞恶性增殖引起的恶性肿瘤，可在骨髓中积累导致骨髓衰竭。MM的治疗通常包括免疫调节剂和造血干细胞移植等方式，但是疗效并不理想。嵌合抗原受体T细胞疗法是近年来出现的一种新型免疫疗法，通过体外基因编辑技术改造患者的T细胞，使其能够特异性识别肿瘤细胞的表面抗原，从而达到靶向杀伤肿瘤细胞的目的。此文主要就嵌合抗原受体T细胞在MM治疗中的应用及靶点作一介绍。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 171-174. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220721-00041甲型流感病毒基质蛋白2胞外功能区（matrix protein 2 ectodomain，M2e）通用疫苗的确切保护机制尚未明确，但其能减轻流感症状，抑制病毒的复制、存活和传播。通过使用M2e四聚体通用疫苗、M2e病毒样颗粒疫苗以及M2e多表位通用疫苗联合佐剂等，可提高保护效果，未来具有较大应用价值。此文通过收集相关文献资料、结合临床实践以及相关动物试验等，综述甲型流感病毒M2e通用疫苗的研究现状、免疫机制及其特点，以期为相关研究提供理论基础。
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国际生物制品学杂志. 2023, 46(3): 175-180. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20220819-00053通过高效消毒切断病毒传播途径是有效控制疫情的关键手段。半导体光催化技术通过在光照条件下释放的大量活性氧破坏病毒衣壳从而使病毒失活，是一种绿色、节能、高效的新型消毒技术。此文系统阐述了金属/金属氧化物光催化剂、非金属光催化剂等各类光催化材料在病毒消杀中的作用及其机制，总结了当前光催化材料在个人防护和空气、废水、物流货物等消毒中的实施效果，可为半导体光催化技术在切断病毒传播途径和有效控制疫情提供重要参考。
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