2021年, 第44卷, 第6期 刊出日期：2021-12-10
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 301-304. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210524-00025
目的 采用40层细胞工厂（CF40）替代15 L转瓶工艺制备乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗。方法 分别采用CF40和15 L转瓶工艺制备乙脑减毒活疫苗，通过显微镜观察和细胞计数来考察细胞质量。病毒收获时观察细胞病变情况，并对2种工艺制备的原液、半成品以及成品进行病毒滴度检测对比，成品37 ℃放置7 d考察成品热稳定性。结果 两种工艺相比，细胞工厂内单位面积内细胞数量差异存在统计学意义（P＜0.05》），生长一致性和单只地鼠制备的细胞数量均优于15 L转瓶；CF40和15 L转瓶制备的单一病毒收获液平均滴度分别为7.59 lgPFU/ml和7.56 lgPFU/ml，没有显著差异(P＞0.05)，但CF40单一病毒收获液收率一致性更好；两种工艺制备的原液、半成品、成品滴度以及7 d后37 ℃热稳定性均符合企业注册标准规定。结论 使用CF40制备乙脑减毒活疫苗是可行的，并且在产品收率和一致性方面优于15 L转瓶工艺。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 305-309. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn 311962-20210625-00035
目的 用短串联重复（short tandem repeat，STR）序列基因分型法对人用疫苗检定用MRC-5和RD细胞进行鉴定，确认无交叉污染，为疫苗的安全性提供保障。方法 选取人源细胞的20个STR位点进行等位基因PCR扩增及荧光检测，将得到的STR图谱与美国典型培养物保藏中心和德国微生物菌种保藏中心数据库比对分析。 结果 两株细胞均得到清晰的STR特征性图谱，未出现三单位基因，在两个数据库中均找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论 我所人用疫苗检定用MRC-5和RD细胞均为正确细胞株，不存在污染和交叉污染。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 310-314. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn 311962-20210927-00056目的 评价新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）无菌分装工艺过程，确保疫苗安全性。方法 根据质量风险管理原则，运用失败模式和效果分析的风险管理工具评估影响新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）分装过程无菌的潜在风险。用胰酪大豆胨液体培养基为介质，模拟新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）半成品的无菌分装工艺过程，从最差条件的选择、模拟干预动作的设计、模拟分装试验品培养、促生长试验、完整性试验5个方面设计基于风险评估的无菌分装工艺模拟试验方案，进行连续3次成功的培养基模拟灌装试验。结果 连续3次试验培养基污染瓶数为0；各项检测试验结果均符合可接受标准。结论 新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）分装工艺满足法规对产品无菌性的要求，无菌风险可控，可用于新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）半成品的分装。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 315-317. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210524-00022
目的 摸索乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液最适冻融条件。方法 将单次病毒收获液于不同温度中冻存不同时间后，在不同条件下融解，用噬斑法检测收获液病毒滴度，通过数据分析找到最适冻融方法。调整冻存袋内冻存病毒液的体积，确定冻存量对冻融效果的影响。结果 -70 ℃条件下冻存6个月，27 ℃水浴中解冻，对不同冻存量冻融前后单次病毒收获液滴度变化进行统计分析F=0.182，P=0.907。结论 确定了乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液最适冻融条件。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 318-322. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210901-00049
目的 研究抗柯萨奇病毒A组10型（Coxsackievirus A10，CV-A10）中和抗体检测用毒株的应用。方法 对CV-A10毒株进行扩增培养，建立3级种子批并进行相关检定。采用3人3次独立测定病毒滴度，对工作种子批进行滴度标定，通过分别与肠道病毒71型（enterovirus A71，EV-A71）、CV-A16、CV-A6免疫血清进行交叉中和反应，评价该毒株的专属性。对CV-A10自然感染人血清和CV-A10小鼠免疫血清样品进行中和抗体效价检测，对其应用进行评价研究。结果 获得一株CV-A10中和抗体检测用毒株，3级种子批的无菌检查、支原体检查等项目均符合中国药典2020年版三部相关要求；经标定，平均病毒滴度为7.903 lg半数细胞培养物感染量（50% cell culture infectious dose，CCID50）/ml（95%置信区间：7.868~7.937 lgCCID50/ml），变异系数为1.10%；与EV-A71、CV-A16、CV-A6免疫血清无交叉反应，专属性良好；检测CV-A10自然感染人血清和CV-A10小鼠免疫血清，中和抗体的最大值与最小值倍数差均小于4，中和抗体检测变异系数分别为6.38%和3.64%。结论 抗CV-A10中和抗体检测用毒株具有较好的专属性可很好的应用于后续抗CV-A10中和抗体的相关检测。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 323-328. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210709-00037
目的 考察不同制剂工艺流程下制备的重组四价人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗的抗原吸附效果、稳定性及免疫原性，根据实验结果筛选出最合适的制剂配方及工艺。方法 通过改变重组四价HPV疫苗的缓冲体系，以及氢氧化铝佐剂的含量、混合工艺、吸附方式与吸附条件，配制不同的实验疫苗，观察其外观，并分别进行蛋白质稳定性、抗原吸附率和小鼠体内半数有效剂量的检测。 结果 重组四价HPV疫苗原液与450 μg/ml氢氧化铝佐剂在pH6.5的组氨酸缓冲体系下混合后的实验疫苗，外观均一性良好，抗原蛋白稳定性最高，Tm=87.4 ℃，小鼠体内免疫原性较好；搅动吸附条件下的4型别HPV抗原吸附率明显高于静止吸附；铝佐剂和抗原蛋白的吸附与混合先后顺序，不同吸附比例、温度和时间对疫苗外观无显著影响，抗原吸附率均大于99.00%。结论 确定了重组四价HPV16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗合适的制剂工艺条件。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 329-332. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210515-00020
目的 分析在人凝血因子Ⅷ(human coagulation factor Ⅷ，FⅧ)层析纯化上样前增加澄清过滤对FⅧ层析效果的影响。方法 采用直接上样和澄清过滤后上样两种方式各10批次进行层析纯化，比较层析参数（流速、柱压、上样量）、洗脱液效价、洗脱液体积、洗脱液比活性、成品量及成品质量指标（效价、水分、可见异物、磷酸三丁酯残留量、聚山梨酯80残余量）。结果 经澄清过滤后上样洗脱液效价高于直接上样且差异有统计学意义（t=28.56，P=0.000），层析参数（流速、柱压、上样量）和洗脱液体积（t=0.51，P=0.310）、洗脱液比活性（t=0.56，P=0.296）差异均无统计学意义，成品产量高于直接上样且差异有统计学意义（t=23.14，P=0.000）。使用澄清过滤后，成品质量指标效价（t=0.95，P=0.183）和水分（t=1.12，P=0.145）差异无统计学意义、可见异物、磷酸三丁酯残留量、聚山梨酯80残余量符合质量标准。结论 在FⅧ层析生产过程中，增加一步澄清过滤能提高层析收率和成品收率，且对产品质量无影响。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 333-338. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210310-00011
病毒类生物制品包括病毒性疫苗以及用于基因治疗和肿瘤治疗的各种病毒载体药物，其研发和生产过程需要建立准确而快速的检测方法，用于评价工艺效果。滴度的测定是检测病毒类生物制品活 性和效力的直接数据佐证，也是评价生物制品质量的关键指标之一。本文主要对噬斑法、半数感染剂量测定法、荧光定量PCR技术、病变灶免疫化学法、报告基因法等病毒滴度检测方法的原理、特点及研究进展进行综述。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 339-345. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210331-00015IL-17E（又称IL-25）作为近几年来新发现的IL-17家族成员，凭借其独有的结构和功能，不仅介导Th2型免疫反应在过敏性疾病和抗寄生虫感染中发挥重要作用，而且在控制Th1/Th17介导的炎症反应中也有重要的作用。其独有的双重作用机制及其在肿瘤免疫中的作用越来越受到关注。此文就IL-17E和其受体的结构特征、功能特点及其在不同肿瘤中的生物学作用进行综述，以期为IL-17E在肿瘤中相关作用的研究提供参考。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 346-352. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210224-00007宫颈癌主要是由高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）持续性感染诱发，目前，HPV预防性疫苗已经取得重大突破，主要用于9~45岁女性宫颈癌的预防，但对于已感染者无任何治疗作用。消除宫颈癌不仅需要广泛接种预防性疫苗，也需要研究开发更好的治疗手段，因此HPV治疗型疫苗的研制也十分必要。当前，HPV治疗性疫苗主要包括亚单位疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗、细胞疫苗等，通过递送HPV癌转化相关的靶抗原、激活特异性细胞免疫等机制清除HPV感染细胞、消减HPV相关病变从而对肿瘤发挥治疗作用。HPV治疗性疫苗的研制具有重要的临床意义和广阔的应用前景，本文主要针对近年来HPV治疗性疫苗的研究进展进行综述。
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国际生物制品学杂志. 2021, 44(6): 353-360. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20210913-00051
病毒载体能够携带外源基因并包装成感染性病毒颗粒，介导外源基因的转移和表达。腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合入宿主细胞染色体等优点，被认为是最有效的转基因载体之一，哺乳动物来源的各种腺病毒被广泛用于基因治疗、肿瘤治疗及疫苗等领域。此文对腺病毒载体的特点及研究进展做一综述。
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