2020年, 第43卷, 第3期 刊出日期：2020-06-10
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 105-109. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20200116-00003目的 构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus，H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒，为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法 通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）编码基因，并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒 pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan，VTT）于Vero细胞中发生同源重组后，筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA），并对其进行鉴定。结果 反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp，与预期相同。DNA测序证实，改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明，HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示，rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性，血凝滴度为1∶32。结论 重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 110-112. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20200402-00033目的 对国产水痘减毒活疫苗进行质量分析，判断疫苗的安全性和有效性。方法 取2019年生产的102批水痘减毒活疫苗，进行鉴别试验、外观、pH值、渗透压摩尔浓度、水分、病毒滴定、热稳定性、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量、无菌、异常毒性、细菌内毒素含量的检查。结果 各项检查结果均符合《水痘减毒活疫苗制造与检定规程》和中国药典2015年版三部相关要求，病毒滴定和热稳定性试验结果均在3.4 lg噬斑形成单位/0.5 ml以上。结论 国产水痘减毒活疫苗是安全有效的。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 113-115. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20191218-00070目的 通过研究3个批次无菌异丙醇在3种不同洁净度的环境中开瓶后，瓶内外观、无菌状态及异丙醇含量是否受到环境影响，初步确定无菌异丙醇开瓶后有效期。方法 从3个批次无菌异丙醇中每个批次随机选取162瓶，每个批次分别放置在A级、D级无菌室，无级别库房各54瓶。喷瓶的喷嘴始终处于打开状态，每个工作日进行3次喷雾操作。在第0、1、7、14、21、30天，检测异丙醇溶液的外观性状；采用薄膜过滤法测定异丙醇溶液中微生物的污染情况；采用气相色谱法测定异丙醇含量，并用独立样本t检验方法进行统计学分析。结果 实验期间所有异丙醇溶液外观无变色、无沉淀、无悬浮物，气味无变化，未出现微生物污染；异丙醇含量为体积分数（69.98~70.17）%，达到标示含量。通过统计学分析，异丙醇含量差异无统计学意义（t值0.07~2.18，p值均＞0.05）。结论 异丙醇在A级、D级无菌室和无级别库房开瓶后使用时间建议不超过30 d。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 116-119. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20191218-00069目的 比较不同公司生产的无血清培养基对病毒性疫苗生产用Vero细胞培养效果，及基因工程胰蛋白酶的细胞消化效果，以判断是否适用。方法 实验组用VirusPro Vero-A培养基进行Vero细胞的培养，用Trpzyme消化细胞。对照组用VP-SFM培养基进行细胞培养，用TrypLE Select消化细胞。两组Vero细胞以相同密度接种在T175培养瓶中，以相同的培养条件和传代方法在T175瓶和细胞工厂中各培养3代。培养期间观察细胞的上清液、形态以及汇合度，消化后检测细胞活率并计算细胞收获量。采用配对t检验比较两组消化液的pH值、总消化时长、37 ℃消化孵育时长、细胞活率以及细胞收获量。结果 两组细胞生长状态均良好。配对t检验显示，实验组消化液的pH值（6.99）、总消化时长（17.28 min）和37 ℃消化孵育时长（6.93 min）均值均大于对照组消化液的（分别为6.75、12.34 min、3.30 min），细胞活率（94.79%）及细胞收获量（T175瓶：3.91×107个；细胞工厂：1.90×109个）均值均高于对照组的（分别为90.20%、3.33×107个、1.26×109个），且差异有统计学意义（t值分别为9.17、3.46、2.98、2.31和4.38，P值均<0.05）。结论 实验组无血清培养基培养效果较好，基因工程胰蛋白酶细胞消化液温和、细胞损伤小，均适用于Vero细胞。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 120-125. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20191218-00071目的 用响应面法对马来酰亚胺活化相对分子质量40 000的聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）（MAL-PEG40K）修饰胰高血糖素样肽1类似物（glucagon-like peptide-1 analog，GLP-1a）的反应条件进行优化。方法 对GLP-1a浓度、GLP-1a/MAL-PEG40K摩尔比、反应液pH值、反应温度、反应时长进行单因素试验。以前3个条件为自变量， PEG修饰率为响应值，根据中心组合试验设计原理，研究各自变量及其交互作用对PEG修饰率的影响。通过高效液相色谱法分析PEG修饰率，依据回归分析确定各反应条件的最优值。 结果 GLP-1a与MAL-PEG40K的最佳反应条件为：GLP-1a浓度2.5 mg/ml，GLP-1a/MAL-PEG40K摩尔比1∶1.25，反应液pH 8，反应温度4 ℃，反应时长60 min。该优化条件下，GLP-1a的PEG修饰率可达91.0%。结论 响应面法获得了GLP-1a与MAL-PEG40K的最佳反应条件。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 126-131. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20191204-00066目的 探讨pH值、聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）含量和离心条件对PEG4000粉末用于去除人C1酯酶抑制剂（C1 esterase inhibitor，C1-INH）制备原料中的IgM效果的影响，并通过对羧甲基（carboxymethyl，CM）离子交换层析中洗脱盐离子浓度的筛选，分离活性与非活性C1-INH。方法 向不同pH值的C1-INH制备原料中加入不同质量分数的PEG4000，于不同条件下离心后，用特定蛋白检测仪对离心后上清液中IgM和C1-INH含量进行检测，确定PEG沉淀法纯化C1-INH的最佳条件。将离心后上清液调节pH后作为CM离子交换层析上样样品，使用不同盐离子浓度的洗脱液对活性C1-INH进行分离，确定最佳的盐离子浓度。结果 在弱酸性pH（6.8）下，当PEG4000质量分数为12%，离心条件15 000×g、25 ℃、20 min时，IgM去除率>99%，且C1-INH的回收率>80%；在盐离子浓度为200 mmol/L时，产物中C1-INH的比活性最大（4.43 IU/mg），且绝大多数杂质蛋白得以去除。结论 优化条件下PEG4000能有效去除C1-INH制备原料中的IgM，且能保持较高的C1-INH回收率；CM离子交换层析能对活性与非活性C1-INH进行有效分离，并去除大多数杂质蛋白。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 132-135. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20191024-00057目的 在白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产车间玻璃瓶清洗剂的变更中，引入质量风险管理，对新清洗剂进行风险分析与评估，以确保更换清洗剂对产品质量无影响。方法 运用风险评估工具对新清洗剂进行相应风险评估，根据风险级别制定风险控制措施，对新清洗剂进行验证，确认其清洗效果以及对产品的影响。结果 清洗后玻璃瓶淋洗水中细菌内毒素含量≤0.25内毒素单位/ml、总好氧微生物计数≤100菌落形成单位/ml、总霉菌酵母菌计数≤10菌落形成单位/ml、总有机碳≤1.5 μg/cm2（淋洗水和擦拭取样）、电导率≤1.3 µS/cm，结果均符合要求。结论 在变更控制中运用质量风险管理，指导变更控制措施的制定和变更内容的实施，保证了新清洗剂的风险可接受且产品质量不受变更影响。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 136-143. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20200324-00030随着新型高危病毒的出现，使用野生型病毒株进行研究的传统方法显示出局限性，迫切需要一种新方法。体外构建假病毒具有安全稳定、宿主嗜性广等优点，已被广泛应用于中和抗体检测、抗原表位研究、病毒与宿主细胞间相互作用研究、抗病毒药物筛选等领域，是一种安全有效的研究手段。为了进一步评价疫苗、抗体、抗病毒药物的体内保护效果，建立便捷可靠的假病毒动物模型显得尤为重要。此文对假病毒的应用、假病毒动物模型的建立等方面做一综述，总结相关领域的研究进展。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 144-148. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20200108-00001人胰高血糖素样肽1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）是治疗2型糖尿病的主要药物，其长效性是一个重要指标。GLP-1化学合成工艺复杂、成本较高，因此通过基因工程获得重组长效GLP-1类似物成为目前的研究方向。此文对近年来通过基因工程获得重组长效GLP-1类似物的研究进行综述。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 149-154. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20200408-00037此意见书取代2008年WHO关于伤寒疫苗的意见书，介绍伤寒结合疫苗和多糖疫苗的免疫原性、效果、同时接种、成本效益、特殊人群接种和WHO关于使用新一代伤寒结合疫苗的建议和意见。
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国际生物制品学杂志. 2020, 43(3): 155-156. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn311962-20200407-000352019年9月7—10日，国际肺癌研究会在巴塞罗那举办世界肺癌会议，全球多位肺癌研究人员和临床医生参会。此文介绍了会议上展示的5个重要成果。
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