2019年, 第42卷, 第3期 刊出日期：2019-06-10
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 105-108. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.001目的 研究苯酚提取法对A 群脑膜炎球菌多糖料液中细菌内毒素含量的影响。方法 用苯酚对A 群脑膜炎球菌多糖料液进行提取，比较粗制多糖不同溶解倍数、苯酚提取过程中采用不同搅拌转数、提取次数、提取温度等因素对多糖细菌内毒素含量的影响。 结果 粗制多糖采用4.5%醋酸钠溶液1∶100（质量体积比）溶解后进行苯酚提取的多糖细菌内毒素含量最低。同时，综合考虑多糖料液中蛋白含量、多糖回收率的检定结果，确定用苯酚进行提取的最佳条件为搅拌转数为400 转/min，提取次数为3次，温度为13～15 ℃，可有效降低多糖料液中细菌内毒素的含量。 结论 苯酚提取法可明显降低A 群脑膜炎球菌粗制多糖料液中的细菌内毒素含量。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 109-111. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.002目的 评价杀孢子剂、“84”消毒液、酸性苯酚盐、碱性苯酚盐对Sabin株脊髓灰质炎病毒的杀灭效果。方法 首先采用中和剂鉴定试验鉴定消毒剂的中和剂，然后通过悬液定量病毒杀灭试验比较4种消毒剂对Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅱ型的杀灭效果。杀灭对数值>4.0 lg半数细胞培养感染量（50% cell culture infective dose，CCID50）/ml，表示达到消毒效果。结果 中和剂鉴定结果表明，0.5% 硫代硫酸钠可有效中和杀孢子剂和“84”消毒液对病毒的杀灭作用，10%胰蛋白胨大豆肉汤培养基可有效中和酸性苯酚盐和碱性苯酚盐对病毒的杀灭作用。杀孢子剂和1.0%“84”消毒液分别与病毒作用30 min，平均杀灭对数值均>4.0 lgCCID50/ml，达到消毒效果。0.5%“84”消毒液、酸性苯酚盐、碱性苯酚盐分别与病毒作用45 min，平均杀灭对数值仍<4.0 lgCCID50/ml，没有达到预期的消毒效果。结论 杀孢子剂和氯含量较高的“84”消毒液对Sabin株脊髓灰质炎病毒的杀灭效果远大于氯含量较低的“84”消毒液以及酸性和碱性苯酚盐。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 112-115. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.003目的 建立一种定量检测异丙醇消毒剂含量的气相色谱法。方法 采用DB-1气相色谱柱，尺寸为30 m（长）×0.53 mm（内径）×3.00 µm（膜厚）。色谱条件如下：程序升温；以氮气为载气，恒定流速5 ml/min；进样口温度为200 ℃，检测器温度为275 ℃；分流进样，进样量1 µl。对该法进行专属性、准确性、重复性、耐用性验证。结果 异丙醇气体和正丁醇气体完全分离，分离度为25.4。该法在考察范围内线性良好，决定系数为0.999 977。正丁醇稀释液色谱图中没有干扰峰出现。3个浓度级异丙醇测试液的回收率为98%～101%。2名分析员分别检测同一样品的6个平行测试液，测定结果的相对标准偏差为0.5%。结论 建
立的方法专属性、准确性、重复性和耐用性良好，可用于异丙醇消毒剂的定量检测。 -
国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 116-119. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.004目的 建立一种简便、快速的尿酸氧化酶四聚体提取纯化的方法，以适应大规模生产需求。方法 首先通过基因工程的方法获得可以稳定发酵生产尿酸氧化酶的大肠埃希菌菌株，再通过一步萃取法从破碎菌体沉淀中获得尿酸氧化酶蛋白混合物，通过硫酸铵沉淀、离子交换和分子筛层析，最终获得纯化的活性尿酸氧化酶四聚体。结果 通过优化发酵及提取条件，每升发酵液可得到尿酸氧化酶四聚体蛋白约400 mg，其纯度>95%，比活>10 U/mg。结论 建立了一种新的尿酸氧化酶四聚体高效提取纯化的方法。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 120-124. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.005目的 建立洁净区环境监测微生物数据库，统计分析悬浮粒子动态监测变化情况，确认疫苗分装区的洁净度符合疫苗生产要求。方法 对疫苗分装区进行空气调节系统性能再验证环境监测，对该区域的培养基灌装试验进行在线环境监测，对以上所有环境监测获得菌进行菌型分析，建立环境监测微生物数据库。结果 在分装前准备、分装中产品入柜和排除故障、分装后清场期间，悬浮粒子浓度变化明显，出现峰值（≥0.5 μm悬浮粒子浓度最大值1 624 粒/m3），但整体水平仍较低。监测到的微生物主要菌型包括里拉/藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、人葡萄球菌、科氏葡萄球菌科氏亚种、沃氏葡萄球菌等。结论 疫苗分装区洁净度符合无菌药品生产要求，环境监测微生物数据库的建立和悬浮粒子监测结果的统计分析，为制定有效的无菌药品生产质量控制措施提供了必要且针对性较强的依据。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 125-128. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.006目的 利用响应面法对Fractogel EMD TMAE介质在静注人免疫球蛋白层析纯化中的应用条件进行优化，确立最佳层析参数。方法 采用双因素三水平响应面法设计层析参数pH值和电导率，用双缩脲法和高效液相色谱法分别测定蛋白浓度和分子大小分布，以蛋白回收率、单体＋二聚体含量评价纯化效果，获得最优层析参数并进行验证。结果 优化的层析纯化平衡和上样条件为pH 5.40，电导率1.05 mS/cm。在该条件下以血浆组分Ⅱ为原料，层析后蛋白回收率为（96.6±3.1）%，IgG单体＋二聚体比例为（99.98±0.02）%，IgA含量为（2.6±1.1）mg/L，IgM含量为（4.5±1.4）mg/L。结论 采用经响应面法优化后的Fractogel EMD TMAE层析条件，可用于纯化血浆组分Ⅱ制备静注人免疫球蛋白制品。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 129-133. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.007目的 对比用低温乙醇蛋白分离工艺制备的静注人免疫球蛋白（pH4）和两步阴离子交换层析制备的静注人免疫球蛋白（10%）产品质量指标，分析制备工艺对产品质量的影响。方法 对2种工艺的产品进行IgA含量、分子大小分布、抗-HBs效价、蛋白空间结构、Fc片段活性、抗体谱和IgG亚型分布等指标的检测和对比分析。结果 两步阴离子交换层析制备的静注人免疫球蛋白的IgA含量（5.30 μg/ml）明显低于低温乙醇分离制备的（281.95 μg/ml），而分子大小分布、抗-HBs效价、蛋白空间结构、Fc片段活性、抗体谱、亚型分布指标没有明显差别。结论 两步阴离子交换层析制备的静注人免疫球蛋白（10%）具有更高的安全性。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 134-137. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.008目的 研究一步离子交换层析法制备人凝血因子Ⅷ（factor Ⅷ，FⅧ）/血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）混合物的最适层析条件。方法 以含不同浓度氯化钠的缓冲液进行线性递度洗脱来确定层析缓冲液的最适离子强度和pH值，同时研究上样体积对该法的影响。结果 以pH 7.0的含250 mmol/L氯化钠的洗涤缓冲液液和含400 mmol/L氯化钠的洗脱缓冲液液进行离子交换层析，所得产物的FⅧ与vWF效价比约为1∶1，FⅧ回收率为76.51%。结论 采用一步离子交换层析法制备FⅧ/vWF混合物，可使FⅧ与vWF效价比达到约1∶1。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 138-142. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.009目的 在大肠埃希菌中建立同时进行PCR克隆和重组蛋白质快速表达的方法。方法 通过TA载体将包含目的基因和全部蛋白表达元件的蛋白表达单位引入大肠埃希菌后，无需使用任何限制性酶，直接在大肠埃希菌中表达编码的蛋白质。结果 通过小规模或大规模表达多种不同蛋白质，证实了该方法的有效性和可靠性。使用标准光谱（280 nm）定量方法分析纯化的蛋白质，发现绿色荧光蛋白的可溶性蛋白表达量达到30 mg/L，血管内皮生长因子特异性 VH的可溶性蛋白表达量达到20 mg/L。结论 该方法设计灵活，且易于进行多种蛋白质的并行表达，为快速筛选理想的蛋白突变体提供了一新途径。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 143-146. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.010目前，国内许多疫苗生产厂家都在致力于研制以白喉-破伤风-无细胞组分百日咳疫苗（diphtheria，tetanus，acelluar component pertussis vaccine，DTacP）为基础的联合疫苗，而国外不同厂家该类联合疫苗在临床试验中的免疫后抗体检测方法和保护性评判标准有较大差异。此文旨在通过比较不同DTacP-灭活脊髓灰质炎疫苗的临床免疫原性结果，包括血清保护率/血清阳转率和不同方法测定的抗体几何平均滴度，为临床试验方案设计提供依据和思路。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 147-151. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.011人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染在人群中十分普遍，一般无严重临床症状，但在新生儿、器官移植接受者或HIV感染者等机体免疫水平较低的人群中会造成严重的病理损伤。至今尚无HCMV疫苗上市。亚单位疫苗（含多肽疫苗）是HCMV疫苗研发的一个重要方向。此文就HCMV感染机制和HCMV亚单位疫苗研究进展进行综述。
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国际生物制品学杂志. 2019, 42(3): 152-156. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2019.03.012膀胱癌是泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤，中、高危非肌层浸润性膀胱癌的标准治疗方式为单纯经尿道膀胱肿瘤切除术＋膀胱灌注治疗。在众多膀胱灌注药物中，BCG膀胱灌注以其明显的抗肿瘤疗效得到广泛使用。但部分高危患者即使进行了BCG标准灌注治疗，仍会发生膀胱癌复发和/或进展，且后续可供选择的治疗方式很少。近几年随着肿瘤免疫学研究的进展，新型免疫治疗药物的开发为膀胱癌的治疗带来了重大突破。此文对非肌层浸润性膀胱癌TURBT术后BCG等免疫调节剂膀胱灌注及其失败后的免疫治疗方法进行综述。
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