2017年, 第40卷, 第2期　刊出日期：2017-04-10

  

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论著
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  乙型脑炎减毒活疫苗稳定性评价

  朱小农 罗静 刘菊

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 53-57. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673.4211.2017.02.001

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  目的  对乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）的稳定性进行评价。方法   选取2种规格（1、5次人用剂量）的成品乙脑疫苗进行（25±2）、（37±2）℃条件下保存的加速稳定性试验，以及2～8 ℃条件下的长期稳定性考察，检定关键质量指标，并对长期稳定性数据进行回归分析。结果  4批1次人用剂量、2批5次人用剂量疫苗于（25±2） ℃、相对湿度（60±5）%存放3个月，（37±2） ℃、相对湿度（75±5）%存放14 d，其外观、病毒滴度、水分、pH值均符合质量标准。9批1次人用剂量、7批5次人用剂量疫苗在2～8 ℃存放24个月的检定结果均符合质量标准。回归分析显示，在2～8 ℃存放时间每增加1个月，1、5次人用剂量疫苗的病毒滴度分别平均减少0.020和0.017 蚀斑形成单位/ml，水分分别平均增加0.055%和0.047%。根据回归方程因变量均值95%置信区间计算出的乙脑疫苗有效期远长于现行注册标准规定的18个月。结论   被检乙脑疫苗质量稳定性良好，产品安全可靠。
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  自动化系统在水痘疫苗半成品配制中的应用

  郑波 彭晓 魏祯 杨月莲 马相虎 徐敏菁 姚远 王亮

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 58-61. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.002

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  目的  应用自动化系统进行水痘疫苗的半成品配制，以降低劳动强度，提高产品均一性。 方法   采用自动化系统完成水痘疫苗的原液稀释和半成品分装，并与人工操作方法进行比较，包括两种方法的清洁、灭菌和保温效果以及疫苗半成品、成品的检定结果。 结果   自动化操作可使工作人员减少60%，工时缩短80%。两种方法对容器或罐体的清洗和灭菌效果均达到工艺要求。采用自动化方法保温时温度可控。用自动化操作系统制备的半成品疫苗，其滴度差异小于人工操作方法，变异系数分别为0.00%和2.17%。两种方法生产的成品疫苗的稳定性试验结果均达到标准〔病毒滴度不低于3.3 lg蚀斑形成单位（plaque-forming unit，PFU）/0.5 ml〕。自动化和人工方法生产的成品疫苗于37 ℃放置7 d，病毒滴度分别为3.7和3.6 lgPFU/0.5 ml；于2～8 ℃放置18个月分别为3.5和3.4 lgPFU/0.5 ml。 结论   将自动化系统应用于水痘疫苗的原液稀释、半成品分装，可降低劳动强度，提高产品的均一性。
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  非洲绿猴肾细胞中猪圆环病毒1型的检测

  刘艳 于晴川 杜加亮 刘悦越 李东 高加梅 范行良 张韵祺 赵荣荣 国泰

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 62-67. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.003

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  目的   建立轮状病毒疫苗污染事件中的外源因子猪圆环病毒1型（porcine circovirus type 1，PCV1）感染非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）的检测方法。方法  培养感染PCV1的Vero细胞6 d后，通过定性PCR、定量PCR、电子显微镜（电镜）检查和原位杂交检测PCV1的复制与增殖。结果  从感染PCV1的Vero细胞培养物提取的DNA，其PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳可见特异性条带；定量PCR检测显示，感染6 d后病毒总拷贝数是感染前的794.3倍；定性和定量PCR的最低检出浓度均为10^2.0拷贝/ml；电镜观察到PCV1特征性形态病毒颗粒；原位杂交检测到出现深色阳性信号的PCV1阳性细胞。结论  PCV1感染Vero细胞后的复制增殖可以通过上述方法进行检测。
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  重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用研究

  高孟 高丽美 朱赟 陈刚 吴洁 许玲敏 罗永能 庄昉成

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 68-74. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.004

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  目的  研究重组4-1BB配体（recombinant 4-1BB ligand，r4-1BBL）作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型（human papiilomavirus type 16，HPV16）蛋白疫苗（HPV16蛋白疫苗）免疫效果的影响。方法  对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化，并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点将其插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化大肠埃希菌BL21(DE3)，并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定，并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠，用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平，观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。结果  密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达，且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体，电镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比，r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强特异性细胞免疫应答（t=3.525，P=0.024）和产生更明显的肿瘤生长抑制作用（t=2.534，P=0.021）。结论  r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果，具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。
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  响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养工艺

  陈军 李朋伟 孙燕 张生琰 孙振鹏 马超 刘鹏 李薇

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 75-79. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.005

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  目的   以响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养条件。方法  以MDCK-siat7e细胞培养的起始氨浓度、乳酸浓度、渗透压和活细胞密度（viable cell density，VCD）为因子，以MDCK-siat7e细胞培养的72 h细胞比生长率、细胞活率、乳酸比生成率和氨比生成率为响应值，采用全因子实验设计和响应面分析来研究这些因子对MDCK-siat7e细胞培养的影响。结果  在MDCK-siat7e细胞培养过程中，对72 h细胞比生长率有显著影响的因子是起始VCD（t=3.43，P<0.05）；对72 h细胞活率有显著影响的因子是起始乳酸浓度（t=4.32，P<0.05）和氨浓度（t=2.86，P<0.05）；对72 h乳酸比生成率有显著影响的因子是起始乳酸浓度（t=8.92，P<0.05）、渗透压（t=4.11，P<0.05）和VCD（t=2.66，P<0.05），其中乳酸浓度起主要作用；对72 h氨比生成率有显著影响的因子是起始氨浓度（t=2.63，P<0.05）。结论  采用响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养工艺可对MDCK-siat7e细胞培养过程中的条件控制起指导作用。
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  原子吸收分光光度法测定葡萄糖中铅含量的建立与验证

  李占辉 杨冰 闫春 谷海燕 马晓宇 栗妍 李丽 王为

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 80-82. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.006

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  目的  建立一种定量葡萄糖中铅含量的原子吸收分光光度法，并验证该法的可行性。方法  采用标准加入法，建立定量葡萄糖中铅含量的原子吸收分光光度法，并对建立的方法进行线性、准确度/精密度和重复性验证。结果  用标准加入法得到的标准曲线线性良好，决定系数>0.998。铅加样回收率为95%～103%，测定结果的相对标准偏差为4%，表明该法的准确度/精密度和重复性良好。该法测定铅的定量限为1.6×10^-7。结论  建立了测定葡萄糖中铅含量的原子吸收分光光度法，且该法的线性、精密度、重复性和定量限均符合现行中国药典的要求。
综述
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  痘病毒载体艾滋病疫苗研究进展

  马志新 徐静

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 83-88. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.007

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   艾滋病是一种传染性强、传播速度快、传播范围广、病死率高的传染病。抗逆转录病毒药物可以抑制感染者体内病毒的复制，但不能将其完全清除。研究显示，以痘病毒为载体，经过局部基因修饰后研制的预防性艾滋病疫苗具有较好安全性和一定免疫原性。此文对痘病毒载体艾滋病疫苗的研究进展进行综述。
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  壳聚糖衍生物在口鼻黏膜疫苗中的应用

  高金爽 徐静 张云涛

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 90-94. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.008

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  壳聚糖是一种有效的黏膜疫苗佐剂和递送载体，但因其水溶性差，应用受到一定限制。通过对壳聚糖进行不同的化学修饰可得到各类壳聚糖衍生物，这些衍生物不仅溶解性较好，而且保持了壳聚糖良好的生物相容性、生物降解性、免疫刺激活性等优势，为黏膜疫苗，尤其是经口、鼻途径递送的疫苗提供了新型候选佐剂和递送载体。此文对修饰壳聚糖的主要方法以及其衍生物在口鼻黏膜疫苗中的应用做一综述。
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  假病毒在中和抗体检测中的应用研究进展

  刘少华 李秀玲

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 95-99. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.009

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   目前成功的病毒性疫苗大多通过诱导广谱有效的中和抗体来保护机体免受感染，因此检测血清中和抗体水平对疫苗的免疫效果评价具有重要意义。中和抗体检测的传统方法包括微量细胞病变抑制法、蚀斑减少试验等，均需进行活病毒操作。近年来，随着逆转录病毒载体和重组病毒表达技术的发展，假病毒得到越来越多的研究，并被广泛应用在新型疫苗研发、中和抗原表位鉴定、细胞嗜性研究、抗病毒药物筛选、中和抗体检测、基因治疗等方面。此文主要对假病毒在中和抗体检测中的应用进行综述，并总结相关领域的研究进展。
标准与指南
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  WHO关于登革热疫苗的意见书

  国际生物制品学杂志. 2017, 40(2): 100-104. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.010

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  此文介绍了登革热疫苗的特性、免疫原性、效果、保护作用持续时间、安全性、同时接种和成本效益以及WHO对登革热疫苗接种的意见。