目的 建立3种破伤风抗体体外检测方法并比较。 方法 分别构建间接法、双抗原法和毒素结合抑制试验体外测定破伤风抗体，对方法进行线性与范围、中间精密度、准确度、检测限的初步验证。 结果 间接法在浓度范围0.007 8~1.000 0毫国际单位（mili-international unit，mIU）/mL之间呈现良好的线性关系（决定系数= 0.998 6）；双抗原法在浓度范围0.078~10.000 mIU/mL之间呈现良好的线性关系（决定系数=0.998 7）；毒素结合抑制试验在浓度范围1.95~31.25 mIU/mL之间呈现良好的线性关系（相关系数＞0.98）。方法学验证结果表明3种方法在精密度、准确度、特异性等方面均符合分析方法验证的指导原则。比较3种方法的阳性检出率，差异无统计学意义（χ²=1.34，P=0.513）。 结论 成功建立间接法、双抗原法和毒素结合抑制试验3种体外破伤风抗体检测法，为体外法替代体内毒素中和试验奠定研究基础。

单克隆抗体（单抗）药物已经成为市场上增长最快的一类治疗药物，但开发用于治疗的单抗仍然具有挑战性。此文从制剂开发角度，根据单抗序列分析、高通量实验性评估综述了单抗药物早期成药性研究策略，旨在为筛选鉴定出易于生产及稳定的候选治疗性单抗药物提供参考。

抗体药物具有特异性高、不良反应少的特点，已成为肿瘤治疗的热点。双特异性抗体（双抗）是指同时结合2个不同抗原或同一抗原2个表位的抗体。与单特异性抗体相比，双抗具有高度特异性，增强了治疗有效性和安全性，同时减少了不良反应。已有多种双抗药物获批上市，进入临床研究的双抗药物数量不断增加。双抗药物的形式持续在更新，应用范围也在扩大，在未来具有非常好的应用前景。此文就目前已有的双抗类型、作用机制及目前双抗制备上面临的困难等进行概述。

目的 制备抗汉城病毒（Seoul virus，SEOV）荧光单克隆抗体（单抗），并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。 方法  以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原，采用小鼠杂交瘤细胞融合技术，筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤；小鼠体内诱生法制备单抗腹水，蛋白A亲和层析纯化单抗，并以蛋白质印迹法鉴定其特异性；间接ELISA测定单抗效价和相对亲和力；纯化单抗采用搅拌法标记异硫氰酸荧光素，并分别采用直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法对Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行病毒灭活验证。结果 共筛选出4株特异性抗SEOV L-99株杂交瘤1D5、2E3、3A4及5B7。蛋白质印迹法鉴定4株单抗均与SEOV L-99株核衣壳蛋白发生特异性反应；间接ELISA测定腹水效价为3.13×10^-8~ 1.25×10^-7；相对亲和力顺序为1D5>3A4>2E3>5B7；纯化抗体纯度>95%；异硫氰酸荧光素标记1D5株单抗的结合比率为3.4；直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法检测盲传3代的Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液，病毒灭活验证结果一致。结论 成功筛选到高效价特异性抗SEOV单抗，并制备成荧光单抗，可用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗生产工艺中的病毒灭活验证。

目的  评估Claudin18.2和CD47双特异性抗体（双抗）在小鼠肿瘤模型中的治疗效果。方法  CB-17 SCID小鼠皮下接种胰腺癌BxPC3-hClaudin18.2细胞或结肠癌HT29-hClaudin18.2细胞，然后经尾静脉注射和腹腔注射交替给予双抗或抗Claudin18.2单克隆抗体（单抗）、抗CD47单抗，监测小鼠肿瘤体积和质量变化，依据瘤体积抑瘤率(tumor growth inhibition of tumor volume，TGItv)和瘤重抑瘤率(tumor growth inhibition of tumor weight，TGItw)评价双抗疗效。结果  在胰腺癌模型中，低、中、高剂量双抗组的TGItv分别为47.12%、85.90%和86.48%，TGItw分别为44.16%、80.00%和74.46%。在结肠癌模型中，低、中、高剂量双抗组的TGItv分别为39.30%、48.54%和82.27%，TGItw分别为23.29%、31.53%和73.46%；在同一剂量条件下，抗Claudin18.2单抗组、抗CD47单抗组以及双抗组的TGItv分别为26.60%、21.07%和84.99%，TGItw分别为20.59%、16.30%和78.67%。结论  Claudin18.2和CD47双抗可以有效抑制癌细胞的生长，且动物体内疗效显著优于各单抗，对于肿瘤有较好的治疗潜力。

目的  重组表达人MHC Ⅰ类链相关蛋白A α3结构域（MHCⅠchain related protein A α3 domain，MICA-α3）蛋白及自然杀伤细胞受体2D（natural killer group 2D，NKG2D）蛋白，制备抗MICA-α3单克隆抗体，并检测其结合功能。方法  构建MICA-α3及NKG2D蛋白表达载体，经转化大肠埃希菌BL21菌株表达重组蛋白，通过分子筛、组氨酸标签蛋白层析纯化。用重组MICA-α3蛋白免疫小鼠，采用杂交瘤技术筛选单克隆抗体，用细胞ELISA检测单克隆抗体功能。结果  重组蛋白在大肠埃希菌BL21菌株中以包涵体形式表达。筛选得到5株能和表达MICA-α3的MDA-MB-453细胞结合的单克隆抗体,且不影响MDA-MB-453细胞与NKG2D结合。结论  制备的抗MICA-α3单克隆抗体能与肿瘤细胞结合，同时不影响肿瘤细胞与NKG2D结合。

目的 优化表达抗人IL-17A/F单克隆抗体（单抗）的中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）细胞的培养基，筛选获得高表达且质量可比抗体的国产培养基。方法 用1株表达抗IL-17A/F单抗的CHO细胞，首先筛选出较优的基础培养基和补料培养基组合，并对该组合进行进一步补料策略优化和2 L生物反应器筛选，再经反应器工艺确认比较抗体表达量和产品质量。结果 基础培养基BM-01、补料培养基FM-01和FM-02组合为重组CHO细胞表达抗IL-17A/F单抗最优的培养基组合；其中补料培养基FM-01补料策略为培养第3/6/8/10/12天（3%~7%），补料培养基FM-01∶FM-02的补加体积比例为10∶1。在2 L生物反应器中最终抗体表达量超过6.5 g/L，为原工艺的2倍以上，且产品质量一致性好。结论 使用基础培养基BM-01、补料培养基FM-01和FM-02组合，实现了抗IL-17A/F单抗在CHO细胞中的高表达且质量可比，为国产培养基用于规模化生产抗IL-17A/F单抗奠定了基础。

目的  建立并验证测定14型肺炎球菌多糖（pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14，PS14）浓度的双抗体夹心ELISA。方法  采用Protein G亲和层析纯化兔血清，得到兔抗PS14多克隆抗体（多抗）。以鼠抗PS14单克隆抗体（单抗）为捕获抗体，兔抗PS14多抗为检测抗体，碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG为二抗，PS14为参考品建立双抗体夹心ELISA法。确定鼠抗PS14单抗和兔抗PS14多抗的工作浓度，建立标准曲线，并验证该方法的准确性、精密度和特异性，考察佐剂对该方法的影响。结果  鼠抗PS14单抗的最适工作浓度为5 μg/ml，兔抗PS14多抗的最适工作浓度为1 μg/ml，标准曲线的范围为9.375 ~ 600.000 ng/ml，线性良好，相关系数为0.999。测定多糖样品的PS14回收率为110% ~ 140%，多糖蛋白结合物样品的PS14回收率为90% ~110%。平均批内和批间精密度分别是5.64%和7.14%。13价结合物混合样品的PS14回收率为85% ~100%；含有佐剂的疫苗样品的PS14回收率为85% ~110%。结论  成功建立了双抗体夹心ELISA法，该方法准确性、精密度、特异性良好，且检测结果不受佐剂的影响，具有一定耐用性。

目的  制备抗柯萨奇病毒A组2型( coxsackievirus A2,CV-A2)单克隆抗体（单抗），建立CV-A2抗原检测方法。方法  用纯化后的CV-A2全病毒颗粒免疫小鼠，筛选获得抗CV-A2单抗。建立CV-A2抗原检测方法，确定线性范围，对其准确度、精密度、稳定性、专属性进行验证。用 ELISA检测病毒颗粒纯化过程中样品的抗原含量。结果  制备了高效价的抗CV-A2单抗并建立 ELISA抗原检测方法，检测范围为5.00~320.00 ng/ml。高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在89.58%~104.78%之间。重复性验证变异系数分别为2.10%、2.47%、6.18%。中间精密度验证变异系数分别为2.89%、2.69%、1.94%。耐用性验证回收率在84.26%~114.21%之间。包被微孔板于37℃放置3d,样品回收率在90.31%~103.11%之间。专属性验证结果显示该方法只识别CV-A2抗原，与其他抗原均无交叉反应。结论  建立并验证了CV-A2 ELISA抗原检测方法，可应用于病毒纯化过程中样品的抗原检测，还可应用于含CV-A2的手足口病多价疫苗的CV-A2抗原含量检测。

目的　对抗肿瘤坏死因子受体超家族成员4（OX40）单克隆抗体Ab18进行结构优化和生物学活性初步鉴定。方法　采用ELISA检测Ab18与不同物种OX40的种属交叉结合活性。用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测Ab18与HEK293-hOX40细胞的结合活性。采用报告基因法检测Ab18的阻断活性和激动活性。采用点突变技术对Ab18抗体Fc段进行工程化改造，改变Fc段与Fc受体的亲和力。用ELISA和FCM检测其与人Fcγ受体ⅡB和人新生儿Fc受体的结合活性，用报告基因法检测改造后的Ab18及其突变体抗体的激动活性、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）活性。结果　Ab18抗体具有与小鼠、大鼠和恒河猴的种属交叉结合活性，相比对照抗体GBR830和KHK4083，Ab18与HEK293-hOX40的结合活性和阻断活性更强，Ab18与HEK293-hOX40的结合活性半数效应浓度（median effect concentration，EC₅₀）值为366.9 ng/ml，阻断活性半数抑制浓度为657.3 ng/ml。此外，Ab18、GBR830和KHK4083均具有激动活性。Ab18的ADCC活性EC₅₀值为25.7 ng/ml，激动活性EC₅₀值为14.9 ng/ml。Ab18经Fc段改造后，激动活性降低、与人新生儿Fc受体的结合活性增强、ADCC活性保持，具有较好的生物学活性。结论　成功优化了Ab18，优化后的抗体具有更好的生物学活性。